基質細胞衍生因子-1對兔膝關節(jié)軟骨細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、研究目的：
　　觀察基質細胞衍生因子-1（SDF-1）對兔膝關節(jié)軟骨細胞體外增殖的影響，探討SDF-1在軟骨細胞凋亡過程中的作用。
　　研究方法：
　　體外分離培養(yǎng)兔膝關節(jié)軟骨細胞，給予不同濃度(0、1、10、25、50、75、100ng/ml)SDF-1處理24h，同時各濃度組設立平行對照，采用5μg/mlAMD3100與之共培養(yǎng)，采用噻唑藍（MTT）比色法和測定細胞周期觀察各組軟骨細胞增殖。凋亡方面，將軟骨細胞隨機

2、分為四組：對照組、50ng/mlSDF-1組、50ng/mlSDF-1+5μg/mlAMD3100作用組、5μg/mlAMD3100處理組，將各組置于250μmol/L過氧化氫條件下作用2h，錐蟲藍染色計數軟骨細胞存活率；測定各組中半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶（Caspase-3）的活力；流式細胞儀觀察各組軟骨細胞凋亡率的變化；原位末端轉移酶標記法（TUNEL法）檢測凋亡的軟骨細胞。
　　結果：
　　增殖實驗中50ng/ml

3、SDF-1組吸光度值（0.502±0.017）均高于其它各濃度組，且該組G0/G1期細胞比例較少，S+(G2/M)期細胞比例高于其它各組，差異有統(tǒng)計學意義（p﹤0.05）；但與AMD3100共培養(yǎng)后，這一差異表現(xiàn)的不明顯。在凋亡方面，錐蟲藍拒染實驗結果顯示SDF-1組中細胞存活率高于其他三組（p<0.01）；而SDF-1組膜聯(lián)蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素（AnnexinV-FITC）標記(+)的細胞比例（4.0±0.92）％低于其他各組（p﹤

4、0.05）；SDF-1組Caspase-3活力（40.03±2.56）nmolpNA/（h?mg）蛋白也較其他三組低（p<0.01）；TUNEL實驗中SDF-1組細胞核呈棕黃色的軟骨細胞數低于其他各組（p﹤0.05），但各實驗中SDF-1+AMD3100組和AMD3100處理組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　結論：
　　SDF-1在一定濃度范圍內可促進兔膝關節(jié)軟骨細胞體外增殖，且在50ng/ml時軟骨細