去甲斑蝥素對梗阻性腎病腎間質(zhì)纖維化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本課題擬通過UUO動物模型和TGF-β1刺激的腎小管上皮細(xì)胞，從兩個方面進(jìn)行研究:1.觀察NCTD對UUO腎病大鼠腎小管間質(zhì)纖維化及PP2Ac表達(dá)的影響;2.觀察NCTD對TGF-β1刺激的HK-2細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)和PP2Ac表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1.建立UUO大鼠模型:SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組(n=5)、UUO模型組、NCTD低劑量(0.05mg/kg/d)組和高劑量(0.1mg/kg/d)組。采

2、用單側(cè)（左）輸尿管結(jié)扎方法，建立梗阻性腎小管間質(zhì)纖維化大鼠模型，Sham組只游離輸尿管而不結(jié)扎，術(shù)后14天處死動物，取結(jié)扎側(cè)腎臟，同時處死假手術(shù)組大鼠，取出腎組織。
　　2.常規(guī)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞，實驗分組:空白對照組; TGF-β1刺激組; TGF-β1+NCTD干預(yù)組;每組設(shè)3個復(fù)孔。
　　3.采用免疫組化方法、Western blot方法、RT-PCR方法檢測腎組織FN、Col-I、E-cadherin、α-SMA、PP

3、2Ac表達(dá)以及分布情況。
　　結(jié)果：
　　1.NCTD對UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化和腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響:免疫組化、Western blot均顯示，與UUO模型組大鼠比較，NCTD組以劑量依賴方式能明顯抑制FN、Col-I蛋白表達(dá)，同時下調(diào)α-SMA蛋白表達(dá)，上調(diào)E-cadherin蛋白表達(dá)。
　　2.NCTD對UUO大鼠PP2Ac的表達(dá)的影響:免疫組化、Westernblot均顯示，與UUO模型組大鼠比較，NCTD

4、組以劑量依賴方式能明顯抑制PP2Ac蛋白表達(dá)，RT-PCR也顯示NCTD組以劑量依賴方式能明顯抑制UUO模型組大鼠PP2Ac mRNA表達(dá)。
　　3.NCTD對TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)和腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響。
　　Western blot顯示，與TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞組比較，NCTD可以下調(diào)TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞FN、Col-I蛋白表達(dá)，同時下調(diào)α-SMA蛋白表達(dá)，上調(diào)E-cadhe

5、rin蛋白表達(dá)。RT-PCR顯示，NCTD干預(yù)組可以下調(diào)TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞FN、Col-I mRNA表達(dá)，同時下調(diào)α-SMA mRNA表達(dá)，上調(diào)E-cadherin mRNA表達(dá)，抑制腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。
　　4.NCTD對TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞PP2Ac表達(dá)的影響
　　Western blot顯示，與TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞組比較，NCTD可以下調(diào)TGF-β1刺激腎小管上皮細(xì)胞PP2Ac蛋白的表