同種異體肝細(xì)胞移植對(duì)大鼠肝臟纖維化的影響.pdf

1、目的：在動(dòng)物試驗(yàn)及臨床研究中，同種異體肝細(xì)胞移植(Hepatocyte Transplantation，HTx)已經(jīng)被證實(shí)對(duì)許多肝病的治療有效。其可以促進(jìn)肝臟的再生、糾正肝臟代謝性疾病、并能延長(zhǎng)急性肝功能衰竭動(dòng)物的生存期。為了擴(kuò)大肝細(xì)胞移植的適應(yīng)癥，深入對(duì)其機(jī)制的認(rèn)識(shí)，本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法探討了HTx對(duì)肝臟最常見(jiàn)的病理類型——肝纖維化的影響。 研究方法：本研究以肝纖維化大鼠為研究對(duì)象，將長(zhǎng)效示蹤劑CM-DiI標(biāo)記的新鮮異體肝細(xì)

2、胞經(jīng)脾臟移植入受體大鼠的肝臟內(nèi)。于術(shù)后1，2，7，14天收集肝臟及無(wú)血小板血漿標(biāo)本。對(duì)肝臟標(biāo)本的分析，本研究應(yīng)用非線性光學(xué)激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。該方法能夠在不染色的前提下對(duì)肝臟切片標(biāo)本中的膠原纖維進(jìn)行靈敏客觀的成像。結(jié)合免疫熒光染色及應(yīng)用不同波長(zhǎng)的激發(fā)激光，本研究對(duì)同一標(biāo)本的肝細(xì)胞、膠原纖維、肝星形細(xì)胞活性、移植細(xì)胞的植入情況同時(shí)進(jìn)行觀察。由該方法得到的肝內(nèi)膠原分布圖應(yīng)用計(jì)算機(jī)輔助的定量分析技術(shù)進(jìn)行定量。由于在肝臟受到損傷時(shí)，肝星形細(xì)胞

3、(hepatic stellate cell，HSCs)的激活及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子－β1(TGF-β1)的異常升高被認(rèn)為是肝纖維化的關(guān)鍵步驟，因此本實(shí)驗(yàn)在機(jī)制方面重點(diǎn)研究了HTx對(duì)纖維化肝臟內(nèi)的肝星形細(xì)胞活性、外周血中TGF-β1和與其激活及清除相關(guān)的蛋白纖溶酶和α2－巨球蛋白(α2-M)血漿水平的改變。 結(jié)果：四氯化碳(CCl<,4>)間斷腹腔注射21天后大鼠肝內(nèi)纖維化面積百分比為12.22±1.11％，比3天(2.36±0.31％

4、)及14天(6.12±0.37％)者明顯升高，P<0.01。接收肝細(xì)胞移植后.的第14天，大鼠肝臟內(nèi)成膠原纖維面積百分比為3.69±0.44％，顯著低于自行恢復(fù)組(8.25±0.69％)。經(jīng)過(guò)對(duì)活性肝星形細(xì)胞的免疫熒光染色及定量統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)接受肝細(xì)胞移植的大鼠肝臟較同期未接受肝細(xì)胞移植者活性肝星形細(xì)胞減少了6倍之多，P<0.01。血漿學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)：肝纖維化大鼠血漿中的總TGF-β1和活性TGF-β1濃度較正常大鼠明顯升高，P<0.05。

5、在接受肝細(xì)胞移植術(shù)后第一天，血漿中的TGF-β1顯著降低，P<0.01。另外，肝臟纖維化大鼠血漿內(nèi)的纖溶酶水平較正常者為高(5.16±0.42μg/ml vs．1.95±0.22μg/ml，P<0.01)，接受移植后水平顯著下降。α2巨球蛋白水平在肝纖維化大鼠血漿內(nèi)的水平較正常者顯著升高(152.4±27.6 mg/ml vs．18.1±2.5 mg/ml，P<0.01)，接受肝細(xì)胞移植后也發(fā)生了顯著變化。 結(jié)論：1．同種異體肝