白藜蘆醇對(duì)裸鼠胃癌移植瘤組織中凋亡相關(guān)基因PDCD5表達(dá)影響的研究.pdf

1、背景和目的:胃癌是我省乃至我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟以及多基因參與的復(fù)雜過(guò)程。許多研究表明胃癌的發(fā)生、發(fā)展不但與癌基因、抑癌基因有關(guān),而且還與凋亡相關(guān)基因相關(guān)。人程序化死亡分子5(the human programmed cell death5,PDCD5)基因,原名為T(mén)FAR19(TF-1 cell apoptosis related gene19),是由北京大學(xué)人類(lèi)疾病基因中心從人白血病細(xì)胞株TF-1細(xì)

2、胞中克隆的與凋亡相關(guān)的新基因,PDCD5在人類(lèi)50多種正常組織中存在不同程度的表達(dá),尤其在成年人的心肌、睪丸、腎上腺、腎臟及胎盤(pán)中均呈高表達(dá),而在胚胎組織中的表達(dá)均遠(yuǎn)低于成年組織。在人體出現(xiàn)疾病時(shí)的組織,特別是腫瘤組織中低表達(dá)或不表達(dá)。研究表明,PDCD5促進(jìn)多種細(xì)胞凋亡,在凋亡過(guò)程中表達(dá)增加。外源性的PDCD5經(jīng)一定方式導(dǎo)入多種細(xì)胞系后,其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特征沒(méi)有產(chǎn)生明顯的影響,說(shuō)明其單獨(dú)作用效能低。但如果采用化療藥物處理、TRAL處理、

3、撤除細(xì)胞因子、撤除血清、射線輻照、抗FAS抗體處理等,均可明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡。研究結(jié)果表明PDCD5是有效的凋亡促進(jìn)劑,而非凋亡誘導(dǎo)劑。白藜蘆醇(resveratrol,Res)是廣泛存在于葡萄、花生、虎杖等藥用植物中的多酚類(lèi)化合物,為一種低毒的天然藥物,其對(duì)消化、呼吸、生殖、血液等系統(tǒng)來(lái)源的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著的抑制作用,并可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　本課題組已體外觀察了白藜蘆醇對(duì)胃腺癌BGC-823細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用以及對(duì)BGC-8

4、23細(xì)胞中PDCD5蛋白和mRNA表達(dá)的影響。為進(jìn)一步深入探討白藜蘆醇對(duì)胃癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因PDCD5表達(dá)的影響,本研究構(gòu)建裸鼠胃癌移植瘤模型,運(yùn)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)移植瘤組織中PDCD5蛋白表達(dá);采用原位雜交方法檢測(cè)移植瘤組織中PDCD5 mRNA表達(dá);采用TUNEL法檢測(cè)移植瘤細(xì)胞的凋亡程度。
　　材料和方法:1.標(biāo)本及分組構(gòu)建裸鼠胃癌移植瘤模型:人胃低分化腺癌BGC-823細(xì)胞購(gòu)自中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。將BGC-

5、823細(xì)胞復(fù)蘇后,實(shí)驗(yàn)組采用200μmol/L的白藜蘆醇處理BGC-823細(xì)胞72h(本課題組體外實(shí)驗(yàn)已證實(shí)此濃度和此作用時(shí)間效果最好),并設(shè)空白對(duì)照組(培養(yǎng)液對(duì)照組),順鉑組(3μg/ml),聯(lián)合用藥組(白藜蘆醇200μmol/L+順鉑3μg/ml)。分組將細(xì)胞種植于裸鼠皮下,構(gòu)建裸鼠胃癌移植瘤模型。2.運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)各組胃癌移植瘤組織中PDCD5的蛋白表達(dá)。3.應(yīng)用原位雜交技術(shù)檢測(cè)各組胃癌移植瘤組織中PDCD5的mRNA

6、表達(dá)。4.采用TUNEL法檢測(cè)胃癌移植瘤細(xì)胞的凋亡程度。5.采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±S)表示,兩組均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)(t-test);兩組以上均數(shù)的比較采用方差分析(ANVOA);以a=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:1.PDCD5蛋白及mRNA在胃癌移植瘤細(xì)胞中的表達(dá):PDCD5蛋白定位于胃癌移植瘤組織細(xì)胞胞質(zhì)中,呈棕黃色顆粒;PDCD5 mRNA亦定位于胃癌移植瘤組織細(xì)胞胞質(zhì)

7、中,呈藍(lán)紫色顆粒。2.免疫組織化學(xué):200μmol/L白藜蘆醇處理的實(shí)驗(yàn)組中PDCD5蛋白表達(dá)水平(10.18±0.87)明顯高于空白對(duì)照組(1.96±0.12),但低于順鉑組(15.20±1.75)和聯(lián)合用藥組(18.93±1.97)。上述各組兩兩相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.原位雜交:200μmol/L白藜蘆醇處理的實(shí)驗(yàn)組中PDCD5 mRNA表達(dá)水平(8.23±0.79)明顯高于空白對(duì)照組(1.78±0.10),但

8、低于順鉑組(14.56±1.72)和聯(lián)合用藥組(18.09±1.91)。上述各組兩兩相比,差異均有顯著性(P<0.05)。4.TUNEL染色:TUNEL法檢測(cè)到胃癌移植瘤中凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈棕褐色,染色深淺不一,染色質(zhì)分布不均?？瞻讓?duì)照組中僅見(jiàn)到少數(shù)凋亡細(xì)胞,白藜蘆醇處理組、順鉑組和聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡指數(shù)依次增加,上述各組兩兩相比,差異均有顯著性(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.白藜蘆醇可上調(diào)裸鼠胃癌移植瘤細(xì)胞中PDCD5的蛋白表