Nm23-H1基因轉染前后“肺癌轉移抑制級聯(lián)”相關基因轉錄表達水平變化的研究.pdf

1、肺癌是全世界發(fā)病率和死亡率增長最快，對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。為了探討nm23-H1對“肺癌轉移抑制級聯(lián)”相關基因轉錄表達調(diào)控的影響及其分子機理，本研究應用構建了帶有增強綠色熒光蛋白和野生型nm23-H1 基因的逆轉錄病毒真核表達載體PLXSN-nm23-H1-EGFP，成功轉染到人高轉移大細胞肺癌細胞株L9981中，成功構建轉基因人肺癌細胞株L9981-nm23-H1,并應用RT-PCR技術對人肺癌細胞株L9981轉染nm2

2、3-H1基因后5個“肺癌轉移抑制級聯(lián)”相關基因的轉錄水平進行驗證。 本研究觀察到：1．人高轉移肺癌細胞株L9981具有nm23-H1基因的雜合性缺失。 2．應用質粒DNA的轉化，酶切，連接技術成功構建了逆轉錄病毒真核表達載體pLXSN-nm23-H1-EGFP，將質粒pLxSN-nm23-H1-EGFP轉染L9981細胞株后，nm23-H1-EGFP融合蛋白能夠在L9981細胞株內(nèi)持續(xù)、穩(wěn)定和高效表達。 3．nm

3、23-H1基因轉染可使L9981細胞株中低氧誘導因子-1α (HIF-1α)mRNA表達顯著下調(diào)(p=0.000)。 4．nm23-H1基因轉染可提高L9981肺癌細胞株基質金屬蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)轉錄表達，但差異無統(tǒng)計學意義。nm23-H1基因轉染可提高內(nèi)皮抑素(endostatin)的轉錄表達水平，但差異不具有統(tǒng)計學意義(p=0.055)。 5．nm23-H1 基因轉染可顯著上調(diào)人肺癌細胞株L9981 膜

4、蛋白Semaphorin-3F基因的轉錄表達(p<0.005)。 6．nm23-H1 基因轉染人肺癌細胞株L998l后，窖蛋白-1基因( CAV-1)的轉錄表達水平無顯著變化(P>0.05)。 結論：(1)人高轉移肺癌細胞株L9981中存在nm23-H1等位基因的雜合性缺失。(2)nm23-H1基因可明顯下調(diào)L9981肺癌細胞株中Hif-1α基因mRNA表達水平。(3)nm23-H1基因轉染可以顯著上調(diào)轉Semaphor