辣椒素對乙醇誘導大鼠胃粘膜損傷的保護作用.pdf

1、目的:通過觀察辣椒素(capsaicin,CAP)對乙醇誘導胃粘膜損傷的大鼠胃酸分泌,胃竇區(qū)組織內(nèi)辣椒素受體(vanilloid receptor subtype1,VR1)、降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和P物質(zhì)(substance P,SP),及胃粘膜屏障的影響,探討CAP對乙醇誘導大鼠胃粘膜損傷的影響及其機制。
　　 方法:(1)實驗動物分組:48只SD雄性大鼠

2、,體重180g～240g之間,隨機分為四組:A組(正常對照組)、B組(乙醇模型組)、C組(CAP組)、D組(乙醇+CAP組),每組大鼠12只。(2)實驗方法:所有SD大鼠飼養(yǎng)2周以適應環(huán)境,然后按照以下方法進行實驗:A組:大鼠自由進食進水,生理鹽水10ml／kg／日分2次灌胃,連續(xù)14天。B組:大鼠自由進食進水,50％乙醇10ml／kg／日分2次灌胃,連續(xù)14天。C組:大鼠自由進食進水,CAP5mg／kg／日分2次灌胃,連續(xù)14天。D組

3、:大鼠自由進食進水,CAP5mg／kg／日+無水乙醇兩者體積之比為1:1混合后(即乙醇濃度為50％)分2次灌胃,連續(xù)14天。所有大鼠于實驗結束前24h開始禁食(不禁水),然后進行標本采集。(3)檢測指標及方法:①造模及給藥過程中觀察大鼠的一般情況。②胃酸的測定:所有大鼠經(jīng)麻醉后打開腹腔,將整個胃取出,剪開胃并用2ml生理鹽水清洗胃內(nèi)容物,收集清洗液,用酸堿滴定法測定胃酸。③胃竇組織內(nèi)VR1和CGRP、SP的表達情況:取各組大鼠胃竇組織(

4、約0.5cm×0.5cm)全層一塊,立刻置于4％的多聚甲醛中充分固定2h,石蠟包埋,連續(xù)5μm切片,用免疫組化方法分別進行VR1、CGRP、SP測定。④胃壁凝膠層厚度測定:垂直切取胃竇部1.6mm厚度胃壁厚片,將切取的厚片置于倒置相差顯微鏡暗視野下用目鏡測微尺測定凝膠層厚度。⑤胃粘膜屏障改變:把清洗過胃內(nèi)容物之后的胃置于4％的多聚甲醛中充分固定后,肉眼觀察胃粘膜形態(tài),采用Guth標準改良評分評定胃粘膜損傷情況,并取胃粘膜組織送病理組織學

5、檢查,光鏡下對HE染色后的胃粘膜進行觀察。
　　 結果:(1)動物一般情況:實驗過程中,A組大鼠精神狀態(tài)好,行動靈活,食欲佳,皮毛光澤,大小便正常,體重增加；B組大鼠出現(xiàn)好斗,易激惹,互相撕咬等情況,毛色光澤,體重減輕,但無死亡。C組大鼠精神狀態(tài)好,行動靈活,食欲佳,皮毛光澤,大小便正常,體重增加。D組大鼠精神狀態(tài),活動,皮毛光澤,大小便,體重增加。在灌胃過程中B組有4只大鼠、C組有1只大鼠、D組有2只大鼠曾出現(xiàn)嗆咳,但均無窒息

6、和死亡。(2)胃液總酸度的變化:各組大鼠的胃液總酸度分別為:A組48.27±2.14mmol／L,B組49.23±3.14mmol／L,C組34.12±2.09 mmol／L,D組35.19±3.08 mmol／L。其中A組胃液總酸度顯著大于C組和D組(P<0.05),B組胃液總酸度顯著大于C組和D組(P<0.05),而A組總酸度和B組之間沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05),C組總酸度和D組沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(3)胃竇組織內(nèi)V

7、R1的表達情況:大鼠胃竇區(qū)組織內(nèi)VR1表達水平分別為:A組0.62±0.49分,B組0.59±0.48分,C組2.61±0.34分,D組2.56±0.48分。其中C組及D組VR1表達水平均顯著大于A組及B組(p<0.05),A組VR1表達水平與B組表達水平?jīng)]有顯著性差異(P>0.05),C組VR1表達水平與D組表達水平?jīng)]有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(4)胃竇組織內(nèi)CGRP情況:大鼠胃竇組織內(nèi)CGRP表達水平分別為:A組1.06±0.4

8、3分,B組0.72±0.32分,C組2.19±0.57分,D組1.87±0.48分。其中B組CGRP表達水平顯著低于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0.05),A組CGRP表達水平顯著低于C組(p<0.05)、D組(p<0.05),D組CGRP表達水平顯著低于C組(p<0.05)。(5)胃竇組織內(nèi)SP情況:大鼠胃竇組織內(nèi)SP表達水平分別為:A組為0.51±0.49分,B組為0.49±0.53分,C組為0.76±0.

9、48分,D組為0.75±0.25分。其中C組SP表達水平較A組略有升高,但沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；其余各組間SP表達水平均沒有統(tǒng)計學意義。(6)胃壁凝膠層厚度:大鼠胃壁凝膠層厚度分別為:A組72.22±6.21μm,B組41.76±5.28μm,C組71.34±4.87μm,D組60.28±5.27μm。其中B組凝膠層厚度顯著低于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0.05),D組凝膠層厚度顯著低于A組(p<0

10、.05)、C組(p<0.05),A組凝膠層厚度與C組凝膠層厚度差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(7)胃粘膜屏障:①肉眼下大鼠胃粘膜損傷情況:A組及C組胃粘膜光滑,B組胃粘膜可見充血水腫、點狀糜爛。D組胃粘膜可見充血水腫,未見糜爛。胃竇粘膜損傷評分(Guth標準改良評分)分別為:A組0分,B組27.42±3.61分,C組0分,D組9.21±2.32分。其中B組粘膜損傷評分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0

11、.05),D組粘膜損傷評分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05),A組粘膜損傷評分與C組粘膜損傷評分沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②大鼠胃竇粘膜病理組織學改變:A組、C組大鼠胃竇粘膜上皮細胞形態(tài)正常,排列整齊,未見粘膜脫落、充血、水腫、炎性細胞浸潤及腺體結構紊亂和壞死。B組大鼠胃竇粘膜鏡下見表層上皮損傷、脫落,粘膜充血水腫,中性粒細胞浸潤,偶可見潰瘍病灶。D組大鼠胃竇粘膜上皮細胞輕度脫落、充血、水腫,未見腺體結構紊亂和壞死

12、上皮細胞、炎性細胞浸潤。大鼠胃竇粘膜病理組織損傷積分(Masuda標準方法)分別為:A組0.12±0.38分,B組3.91±1.10分,C組0.11±0.25分,D組1.21±0.28分。其中B組病理組織損傷積分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0.05),D組病理組織損傷積分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05),A組病理組織損傷積分與C組病理組織損傷積分沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。