GM—CSF基因cDNA克隆和序列分析.pdf

1、目的:目前,國內應用的huGM-CSF產品也多為原核表達產物,而且多為進口制劑,他們應用于國人是否合理,至今尚不清楚,國內huGM-CSF克隆和測序的報道也相對較少.所以,目前有必要深入研究國人GM-CSF基因序列及GM-CSF的特點.本研究目的就是在國內克隆GM-CSF基因cDNA并進行測序,為進一步研究國人GM-CSF基因提供數(shù)據(jù),并為GM-CSF在我國臨床上的合理應用提供一定的實驗依據(jù).方法:取健康人新鮮肝素抗凝的外周靜脈血,以等

2、量PBS稀釋后,用淋巴細胞分離液進行密度梯度離心,收集單個核細胞.將收集的單個核細胞,用含小牛血清、青霉素和鏈霉素的DMEM重懸,取一滴重懸液涂片Giemsa-Wright染色,高倍鏡下觀察單個核細胞.另取一滴重懸液,與臺酚蘭染液混合,于血球計數(shù)板上計數(shù).然后,用含小牛血清、植物血凝素、佛波酯、青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液分三組分別培養(yǎng)所收集的單個核細胞,培養(yǎng)時間依組為2小時、4小時、6小時,然后收集各組培養(yǎng)細胞,并再次Giemsa-