根癌農桿菌介導MdSPDS1和HAL2基因轉化柑橘的研究.pdf

1、柑橘是世界上最重要的水果之一，其面積和產量在所有水果種類中均居第一位，在人們日常生活中占有重要的地位。但是柑橘產業(yè)中還存在著很多問題，如病蟲害及自然災害危害嚴重，成熟期過于集中，品種結構不合理等。全世界大約有20％可耕土地及一半以上的水澆田受鹽漬化影響，并且這種影響在日益加劇，我國也大約有5億畝鹽漬化土地。因為柑橘上存在童期長、多胚性和珠心胚現象、遺傳的高度雜合及單性結實等特點，利用常規(guī)育種方法進行抗鹽品種改良受到限制，影響了育種工作的

2、進行。農桿菌介導的轉基因方法的突破，以及各類植物抗逆相關基因的克隆，為柑橘抗逆基因工程奠定了基礎。 本研究以優(yōu)良柑橘甜橙品種的愈傷組織和上胚軸為外植體，利用根癌農桿菌介導法轉化MdSPDS1和HAL2基因，期望能夠獲得抗鹽的新種質。主要研究結果如下： 1.研究卡那霉素對朋娜臍橙和佛羅斯特臍橙胚性愈傷組織的影響。確定了在柑橘轉化實驗中，篩選抗性愈傷組織的適宜卡那霉素濃度為50 mg／L。 2.對椪柑和錦橙的上胚軸再

3、生體系進行了初步研究。結果表明：BA對上胚軸再生影響最大，當BA濃度為1.0 mg／L時，再生頻率最高；椪柑上胚軸水平和垂直放置時最適宜的再生培養(yǎng)基分別為：MT+1.0 mg／L BA+0.5 mg／L IAA和MT+1.0 mg／LBA+1.0 mg／L IAA；錦橙上胚軸水平放置時最適宜的再生培養(yǎng)基為：MT+1.0 mg／LBA+0.5 mg／L IAA。 3.對影響朋娜臍橙愈傷組織轉化效率的有關因子進行了初步優(yōu)化，實驗表明

4、：當侵染時間為15－20 min、侵染濃度OD<,600>值為0.8、共培養(yǎng)天數為3 d時，轉化效率最高。 4.MdSPDS1基因和HAL2基因轉化朋娜臍橙獲得抗性愈傷組織，經多次選擇繼代，生長正常，分別經nptⅡ和35S-MdSPDS1、nptⅡ和HAL2引物PCR擴增分析鑒定證實為轉基因產物。 5.將得到的MdSPDS1基因轉化朋娜臍橙的轉基因系進行鹽脅迫（100mM），結果表明轉基因系愈傷的鮮重增殖比對照要高，電導