甘草酸單銨鹽對(duì)奶牛脂肪肝細(xì)胞模型脂肪沉積的影響及調(diào)控作用初步研究.pdf

1、奶牛脂肪肝是圍產(chǎn)期發(fā)病率較高的營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病。奶牛脂肪肝常會(huì)造成奶牛產(chǎn)奶量下降，誘發(fā)皺胃變位、胎衣不下甚至產(chǎn)后癱瘓等疾病，而且該病治療成本較高。這嚴(yán)重影響我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。研究奶牛脂肪肝發(fā)病機(jī)制，為有效預(yù)防和治療脂肪肝病提供理論依據(jù)成為奶牛業(yè)當(dāng)務(wù)之急。本研究通過(guò)油酸鈉誘導(dǎo)原代奶牛肝細(xì)胞建立脂肪肝細(xì)胞模型，并探討了甘草酸單銨鹽（Monoammonium glycyrrhizinate，MAG）對(duì)脂肪肝細(xì)胞模型和蛋雞肝臟脂肪沉積的影

2、響。
　　1、油酸鈉建立脂肪肝模型濃度和時(shí)間的篩選使用不同濃度的油酸鈉（0，0.1，0.25，0.5，1 mMol/L）對(duì)原代培養(yǎng)的犢牛肝細(xì)胞作用12 h發(fā)現(xiàn)，當(dāng)油酸鈉濃度為0.25 mMol/L時(shí)，即可出現(xiàn)肝細(xì)胞損傷；油紅 O染色出現(xiàn)脂肪肝細(xì)胞標(biāo)志性的指環(huán)狀細(xì)胞；通過(guò)透射電鏡觀察可見模型組中線粒體空泡化嚴(yán)重，糖原顆粒較少，說(shuō)明油酸鈉在誘導(dǎo)刺激奶牛肝細(xì)胞12 h的情況下，采用0.25 mMol/L濃度的油酸鈉為最佳建模濃度。采用0

3、.25 mMol/L濃度的油酸鈉對(duì)原代肝細(xì)胞作用不同時(shí)長(zhǎng)（0、3、6、9、12、24 h），發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)9 h肝細(xì)胞可出現(xiàn)肝細(xì)胞損傷及油紅 O染色出現(xiàn)脂肪肝細(xì)胞標(biāo)志性的指環(huán)狀細(xì)胞，確定0.25 mMol/L的油酸鈉在誘導(dǎo)刺激奶牛肝細(xì)胞9h的情況下可作為建立體外奶牛脂肪肝細(xì)胞模型的最佳條件。
　　2、MAG對(duì)體外細(xì)胞模型的影響使用0.25 mg/L的MAG對(duì)原代肝細(xì)胞預(yù)處理12 h，再使用建模最佳條件進(jìn)行誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)MAG能夠提高肝細(xì)胞

4、活性，減少肝損傷，降低細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的沉積，下調(diào)脂合成關(guān)鍵基因 ChREBP、脂代謝關(guān)鍵基因 PPARα、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因 MTP。這些都說(shuō)明 MAG能緩解細(xì)胞模型的脂質(zhì)沉積、降低脂代謝關(guān)鍵基因來(lái)延緩細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程，降低了主要氧化場(chǎng)所線粒體的功能負(fù)擔(dān)，從而降低了細(xì)胞損傷程度達(dá)到保護(hù)肝臟細(xì)胞的作用。
　　3、MAG對(duì)蛋雞血脂及肝脂沉積的影響使用不同濃度的MAG（0、25、50、100、200 mg/L）作為飲水添加劑供蛋雞飲用21

5、d后，發(fā)現(xiàn)血清中 TG含量較對(duì)照組顯著下降（P＜0.05），但下降趨勢(shì)并未隨加藥濃度而改變，表明 MAG能夠改善血液中的甘油三酯（Triglyceride,TG)水平。血清中葡萄糖（Glucose， GLU）、總膽固醇（Cholesterol,CHOL）與對(duì)照組無(wú)顯著差異。血清中ALT的量較對(duì)照組顯著下降，表明MAG能夠?qū)Ω闻K起到保護(hù)作用，減少肝臟細(xì)胞損傷。
　　綜上所述，使用油酸鈉建立體外模型最佳條件為0.25 mMol/L油酸