骨髓間充質(zhì)干細胞通過RAP1-NF-κB信號通路分泌細胞因子調(diào)節(jié)同種異體排斥反應.pdf

1、目的:間充質(zhì)干細胞因其擁有的免疫抑制能力和低抗原表達的特性使其在移植免疫領域擁有較強的研究和應用價值。NF-κB信號通路與間充質(zhì)干細胞的免疫調(diào)節(jié)特性相關并且Rap1蛋白是NF-κB信號通路中的重要調(diào)控蛋白，因此Rap1基因敲除會對NF-κB信號通路的活化產(chǎn)生影響。我們通過Rap1基因敲除小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞與其同種同系野生型小鼠間充質(zhì)干細胞的比較，研究Rap1/NF-κB信號通路在干細胞移植免疫排斥反應中的作用機制。
　　實驗方法

2、與結果:我們分別從Rap1基因敲除小鼠及其同種同系野生型小鼠骨髓中提取出骨髓間充質(zhì)干細胞，并對其進行相關的鑒定分析。利用體外混合淋巴細胞反應實驗對兩種間充質(zhì)干細胞的體外免疫調(diào)節(jié)能力進行比較，研究間充質(zhì)干細胞中Rap1蛋白的表達對其自身免疫調(diào)節(jié)能力的影響。研究發(fā)現(xiàn)，兩種間充質(zhì)干細胞對體外混合淋巴細胞反應增殖的抑制作用相似(P＞0.05)。但通過應用兩種間充質(zhì)細胞的培養(yǎng)上清作用于混合淋巴細胞反應，野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(RWT-MSCs

3、)抑制混合淋巴細胞反應增殖的能力強于Rap1基因敲除小鼠間充質(zhì)干細胞（RKO-MSCs）(P＜0.01)。通過流式的方法比較兩種間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-6這4種因子的濃度，我們發(fā)現(xiàn)這四種細胞因子的濃度在兩種間充質(zhì)干細胞在體外培養(yǎng)的上清液中都會發(fā)生變化，表現(xiàn)為野生型間充質(zhì)干細胞分泌細胞因子的能力強于Rap1基因敲除間充質(zhì)干細胞(P＜0.05)，提示Rap1蛋白的表達與骨髓間充質(zhì)干細胞分泌的可溶

4、性細胞因子相關。我們用小鼠心臟移植動物模型，分析兩種間充質(zhì)干細胞與雷帕霉素聯(lián)合干預于小鼠急性心臟移植排斥反應的生存期以及移植物標本的檢測。實驗分為1X雷帕霉素(1XRapa)，2X雷帕霉素(2XRapa)，1X雷帕霉素聯(lián)合RWT-MSCs，2X雷帕霉素聯(lián)合RWT-MSCs，1X雷帕霉素聯(lián)合RKO-MSCs，2X雷帕霉素聯(lián)合RKO-MSCs六組進行。其中2X雷帕霉素與RWT-MSCs聯(lián)合使用組與其他組相比，可以顯著地延長心臟移植物生存期(

5、P＜0.01)，效果最差的組來自野生型干細胞與1X雷帕霉素的聯(lián)合使用，最短生存期僅有6天左右。效果最好的組是野生型小鼠間充質(zhì)干細胞與高劑量雷帕霉素的聯(lián)合使用，最長生存期可以達到30天，并表現(xiàn)與其他組別相比較少的炎癥細胞的浸潤以及移植物中Foxp3的表達增加(P＜0.01)。對小鼠移植排斥時血清蛋白因子濃度進行檢測，發(fā)現(xiàn)2X雷帕霉素聯(lián)合RWT-MSCs組的小鼠血清中IFN-γ、IL-10、TNF-α、IL-6這4種蛋白濃度與其他組相比明顯