兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對喉返神經(jīng)損傷后修復(fù)的研究.pdf

1、摘要目的：1利用全骨髓貼壁的實(shí)驗(yàn)方法，體外分離、培養(yǎng)并鑒定兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，探討依據(jù)此方法制作一種簡便高效的細(xì)胞培養(yǎng)方案的可行性。2成功建立兔左側(cè)喉返神經(jīng)損傷的動物模型，并將適量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到喉返神經(jīng)組織受損區(qū)域，一段時間后，對比觀察其對喉返神經(jīng)損傷后的修復(fù)有無促進(jìn)作用。方法：1采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，傳代培養(yǎng)，通過計數(shù)法繪制P。代細(xì)胞的貼壁率曲線及生長曲線，并通過證實(shí)獲取細(xì)胞具有干細(xì)胞的多向分化潛能，反

2、向鑒定細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2暴露左側(cè)喉返神經(jīng)并在手術(shù)顯微鏡下垂直喉返神經(jīng)縱軸方向切斷1／2直徑寬度后，即刻向損傷區(qū)域注入預(yù)先備好的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，分別于損傷前、損傷即刻及損傷4周后測量喉返神經(jīng)復(fù)合動作電位，分析比較統(tǒng)計學(xué)意義。4周后制作并觀察喉返神經(jīng)病理切片。結(jié)果：1原代細(xì)胞接種24h貼壁，6天后大量增殖；P。代細(xì)胞2h貼壁30％以上，12h貼壁90％。細(xì)胞生長曲線呈S型，細(xì)胞分別在第2、3、8天，進(jìn)入潛伏期、對數(shù)期和平臺期。細(xì)胞

3、向成骨及脂肪細(xì)胞方向誘導(dǎo)后，試劑染色呈陽性反應(yīng)。2喉返神經(jīng)損傷4周后，將移植組動作電位與假移植組的動作電位進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，結(jié)果為P=O047005，顯示兩組間存在統(tǒng)計學(xué)差異，病理切片對比可見，假移植組的神經(jīng)組織變性較移植組嚴(yán)重。結(jié)論：1全骨髓貼壁法可操作性強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)，所獲得的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度高，活性強(qiáng)，增殖快且數(shù)量較充足，是一種簡便高效的培養(yǎng)方法。2采用神經(jīng)組織橫向半切法可以簡便有效的建立兔喉返神經(jīng)損傷的動物模型，移植后的

4、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對喉返神經(jīng)損傷組織的修復(fù)具有一定的促進(jìn)作用。碩士研究生：宋明艷(耳鼻咽喉科學(xué))指導(dǎo)教師：李娜教授關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；全骨髓貼壁法；移植；喉返神經(jīng)目錄弓I言”1第一部分兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定研究”21材料與方法“211實(shí)驗(yàn)材料2111實(shí)驗(yàn)動物2112主要儀器設(shè)備2113主要試劑3114主要試劑配制與分裝”412實(shí)驗(yàn)方法”4121原代獲取方法4122原代接種及培養(yǎng)方法5123骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代方法512