脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究著眼于脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、增殖及分化，為將來的自體移植提供了來源方便可靠的種子細(xì)胞，為進(jìn)一步細(xì)胞移植治療SCI打下了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)一：為探討胚胎大鼠脊髓神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及體外誘導(dǎo)分化的特點(diǎn)和規(guī)律，利用顯微解剖、無血清細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在E12SD大鼠的胎鼠脊髓中分離出具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞，并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。同時(shí)觀察白血病抑制因子(LIF)對培養(yǎng)的脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響。采用細(xì)胞免疫化學(xué)熒光方法進(jìn)行

2、分化細(xì)胞類型鑒定，并計(jì)算各分化細(xì)胞的比例。 結(jié)果證實(shí)： 1.從E12天SD大鼠胚胎脊髓中成功分離出的神經(jīng)干細(xì)胞具有連續(xù)克隆能力，在表皮生長因子(EGF)，堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)的作用下，脊髓源性NSCs快速增殖，形成多細(xì)胞組成的細(xì)胞球，將這些細(xì)胞球分離成單細(xì)胞重新培養(yǎng)，單個(gè)的細(xì)胞又很快變成細(xì)胞球。這些細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)巢蛋白抗原。 2.雖然白血病抑制因子(LIF)不是脊髓源性NSCs培養(yǎng)所必需的，但是它可明

3、顯促進(jìn)脊髓源性NSCs增殖。誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)顯示：這些細(xì)胞可分化為神經(jīng)元、星型膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，而LIF組則分化很少。因此，從胚胎大鼠脊髓分離神經(jīng)干細(xì)胞是可行的，這些細(xì)胞在體外經(jīng)多次傳代后仍具有較強(qiáng)的增殖能力和多向分化潛能，LIF可以促進(jìn)脊髓源性NSC增殖并抑制其分化。 實(shí)驗(yàn)二：探討嗅鞘細(xì)胞對脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞分化的作用。在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用Millicell插入式細(xì)胞培養(yǎng)皿，大鼠脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞與嗅鞘細(xì)胞在無血清培養(yǎng)液中共培養(yǎng)，通