短期高濃度氟對小鼠磨牙胚中牙本質(zhì)涎蛋白表達的影響.pdf

1、背景：牙齒發(fā)育是由牙源性上皮與顱神經(jīng)嵴來源的外胚間充質(zhì)之間相互誘導、相互作用的復雜過程，其中，牙本質(zhì)不同于釉質(zhì)，來源于外胚間充質(zhì)，是由Ⅰ型膠原和牙本質(zhì)非膠原蛋白先形成支架，碳磷灰石晶體再結(jié)合到此支架上所形成。牙本質(zhì)涎蛋白（dentin sialoprotein，DSP）占非膠原有機成分中的多數(shù)，在牙本質(zhì)生長發(fā)育過程中發(fā)揮了重要作用。氟化物作為一種有效的防齲藥物，近年來得到廣泛應(yīng)用。然而，在牙齒發(fā)育階段通過急性和慢性的方式攝入過量的氟均會

2、抑制成牙本質(zhì)細胞的增殖分化及隨后的基質(zhì)合成與分泌，從而影響牙本質(zhì)的發(fā)育。其特異性發(fā)生機制目前尚無定論。
　　 目的：通過研究短期高濃度氟對新生小鼠下頜第一磨牙不同分化階段的成牙本質(zhì)細胞形態(tài)及細胞內(nèi)DSP表達的影響，探討過量氟對牙本質(zhì)發(fā)育的作用機制以及對DSP生物活性的影響。
　　 方法：從8窩4日齡（postnatal day 4，PND4）小鼠里隨機抽取32只，雌雄各半，根據(jù)單次腹腔注射藥物劑量的不同，按照完全隨機分配

3、的原則先分成兩組，即高劑量組（20mg/kg b.w.）和低劑量組（10mg/kg b.w.），每組16只，然后于各組中隨機分為NaF實驗小組和NaCl對照小組，每小組內(nèi)動物數(shù)量均為8只。注射藥物前稱體重，注射時統(tǒng)一按10μl/g b.w (body weight，體重)進行，即藥物高、低濃度分別為2mg/ml和1mg/ml，完成后所有小鼠返回各自母鼠。24小時后處死動物。實驗前后對所有動物稱重，分析單次腹腔注射NaF和NaCl一日后的

4、小鼠體重參數(shù)有無統(tǒng)計學差異。采用HE染色，光鏡下觀察不同濃度氟對小鼠下頜第一磨牙成牙本質(zhì)細胞不同分化時期的細胞組織形態(tài)學變化，探討不同時期成牙本質(zhì)細胞對氟敏感性的差異。SP免疫組化技術(shù)檢測DSP在對照組與實驗組小鼠下頜第一磨牙成牙本質(zhì)細胞中的表達定位，運用生物圖像分析系統(tǒng)軟件測得相應(yīng)結(jié)果的平均光密度值。統(tǒng)計學處理：SPSS13.0(Statistical package for the social science，社會科學統(tǒng)計軟件包)

5、 建立數(shù)據(jù)庫并進行統(tǒng)計學分析。
　　 結(jié)果：實驗過程中未見動物死亡，經(jīng)統(tǒng)計學分析，藥物注射24小時后，小鼠體重增長在組間差異無顯著性。HE染色結(jié)果顯示：對照組（分別注射10mg/kg b.w.和20mg/kg b.w.的NaCl），分泌期成牙本質(zhì)細胞呈高柱狀整齊排列，細胞核遠離基底膜，牙本質(zhì)基質(zhì)均勻紅染，其間可見牙本質(zhì)小管，成熟期成牙本質(zhì)細胞由高柱狀逐漸向矮立方狀轉(zhuǎn)化。實驗組（分別注射10mg/kg b.w.和20mg/kg b

6、.w.的NaF），細胞的形態(tài)學改變大體相同，但存在細微差異：部分分泌晚期的成牙本質(zhì)細胞有時可見空泡性變，高度變矮，正常的柱狀結(jié)構(gòu)喪失，極性消失，排列紊亂，但這些損害被限制在相對孤立的區(qū)域，成牙本質(zhì)細胞上方的牙本質(zhì)表面可見不規(guī)則的改變。兩組中成熟期成牙本質(zhì)細胞及對應(yīng)的牙本質(zhì)均未見明顯異常。免疫組化染色結(jié)果顯示：DSP在成釉細胞、成牙本質(zhì)細胞、牙髓組織中均有表達。實驗組與對照組相比，在前期牙本質(zhì)和牙本質(zhì)中也有陽性表達，其表達在分泌期的成牙本