蝙蝠葛活性成分抗腫瘤作用及機制的研究.pdf

1、目的：研究蝙蝠葛活性成分體外對人白血病K562細胞株的抑制增殖和誘導凋亡作用，并探討其作用機制，以及蝙蝠葛活性成分體內(nèi)對S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用，為新藥開發(fā)提供實驗和理論依據(jù)。
　　方法：應用MTT法檢測蝙蝠葛活性成分對體外培養(yǎng)的人白血病K562細胞株的抑制增殖作用的影響及細胞毒活性；通過倒置顯微鏡、HE染色及透射電鏡對K562細胞進行形態(tài)學觀察；采用流式細胞儀檢測K562細胞的周期分布相和細胞凋亡率；通過免疫細胞化學S-P法

2、測定凋亡關鍵效應酶Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的表達情況，深入探討蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞株誘導凋亡的機制；采用寇氏（Korbor）法計算小鼠急性經(jīng)口LD50及其95％可信限；用蝙蝠葛活性成分灌胃觀察其對S180荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用；采用血清藥理學實驗方法，觀察含藥血清體外對人肺癌A549細胞株抗增殖作用；采用生命延長率實驗方法，用蝙蝠葛活性成分灌胃觀察其對S180肉瘤小鼠的生命延長作用。

3、r>　　結果：
　?。?）MTT比色法結果表明，蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞株的增殖抑制作用呈劑量依賴性；
　　（2）倒置顯微鏡觀察：蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用后早期細胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學變化：細胞膜鼓泡、凋亡小體形成等；作用晚期細胞發(fā)生膜破裂壞死；
　　（3）HE染色：蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用細胞后出現(xiàn)典型凋亡形態(tài)變化凋亡小體形成、細胞核濃縮呈藍黑色、胞漿呈淡紅色等，核染色質濃縮、呈碎塊狀；

4、　?。?）透射電鏡觀察結果：蝙蝠葛活性成分20μg/ml作用細胞后出現(xiàn)核染色質致密濃縮或斷裂，形成大小不等的凋亡小體；
　?。?）流式細胞儀檢測結果顯示：蝙蝠葛活性成分可以誘導K562細胞發(fā)生凋亡，加藥組出現(xiàn)亞二倍體峰，并且 GO/G1期細胞比例顯著增加，而S期和 G2/M期細胞比例則明顯下降,將細胞阻滯在 GO/G1期；
　　（6）免疫細胞化學結果表明：蝙蝠葛活性成分作用后加藥組Caspase—9、Caspase-8和Ca

5、spase-3表達增加，與對照組相比較均有顯著差異；
　?。?）急性毒性實驗結果，蝙蝠葛活性成分的小鼠急性經(jīng)口LD50及其95%可信限為52.72g/kg和38.12—63.87 g/kg；
　?。?）蝙蝠葛活性成分小、中、大劑量組對小鼠移植性肉瘤S180實體瘤的抑瘤率分別為17.19%、33.43%、42.29%，有顯著的抑制作用；
　?。?）血清藥理學實驗結果，終濃度分別為10%、20%、25%的滅活的含藥（蝙蝠葛

6、活性成分）大白鼠血清對 A549細胞株的增殖抑制率分別為29.03%、30.55%、41.67%，對照組相比P＜0.05；
　　（10）生命延長率實驗結果小劑量及中劑量組延長率為41.66%與33.33%，與對照組相比P＜0.05。
　　結論：
　　1、蝙蝠葛活性成分對人白血病K562細胞株具有抑制增殖和誘導凋亡作用。
　　2﹑蝙蝠葛活性成分對K562細胞抑制增殖作用在20μg/ml作用24h之前主要以誘導凋亡為

7、主。
　　3、蝙蝠葛活性成分誘導凋亡作用機制可能與細胞周期發(fā)生 G0/G1期阻滯有關；并且通過上調Caspase-9、spase-8和Caspase-3蛋白表達，經(jīng)由細胞凋亡的死亡受體通路和線粒體通路完成凋亡的啟動和執(zhí)行。
　　4、蝙蝠葛活性成分對S180荷瘤小鼠具有延長生命的作用，同時對小鼠移植性S180肉瘤具有抑制作用。
　　5、蝙蝠葛活性成分含藥血清在體外對人肺癌A549細胞株增殖有抑制作用。
　　6、急性