串珠素在牙髓損傷修復過程中的時空表達.pdf

1、目的:
　　 通過免疫組化和Real-time PCR研究大鼠牙髓損傷后串珠素及β1整合素的表達變化，探討串珠素在牙髓損傷修復過程中的作用及其可能的機制。
　　 方法:
　　 1.收集健康成年SD大鼠上頜骨磨牙聯(lián)合標本，對比單純EDTA溶液脫鈣和EDTA溶液加微波輻射脫鈣所需時間、包埋后切片質量及HE染色效果。
　　 2.收集牙髓損傷后第1、3、5、7d的SD大鼠一側上頜骨磨牙聯(lián)合標本，對側未損傷標本作為

2、對照，采用EDTA溶液加微波輻射脫鈣，石蠟包埋后近遠中向切片，免疫組化染色，顯微鏡下觀察串珠素和β1整合素在牙髓中的表達變化，并采用IPP軟件分析各組間平均光密度差異。
　　 3.收集牙髓損傷后第1、3、5、7d的SD大鼠一側上頜磨牙牙髓標本，對側未損傷標本作為對照，Trizol法提取牙髓組織的總RNA，檢測OD260/280值并計算RNA濃度，逆轉錄后采用熒光定量PCR檢測串珠素和β1整合素的mRNA相對表達量變化。
　

3、　 結果:
　　 1.大鼠上頜骨磨牙聯(lián)合標本單純采用EDTA溶液脫鈣需24～32d，采用EDTA溶液加微波輻射脫鈣所需為時間為2.5～3h，明顯少于單純采用EDTA溶液脫鈣，而染色效果無明顯差異。
　　 2.牙髓損傷以后1d，串珠素于穿髓點附近的炎癥細胞浸潤區(qū)下方的牙髓組織陽性表達;3d時，在炎癥細胞浸潤區(qū)和附近的牙髓組織及與牙本質交界處有陽性表達;5d時，串珠素在炎癥細胞浸潤區(qū)彌散性陽性表達;7d時，串珠素在炎癥細胞

4、浸潤區(qū)與壞死組織交界處有強陽性表達。對照組正常牙髓組織串珠素有彌散性弱陽性表達。串珠素陽性表達較強的位置隨著炎癥進展的前沿分布，損傷后的牙髓組織染色強度明顯高于對照組(P＜0.05)，并以1d組升高最為明顯。β1整合素在牙髓損傷后3d開始在炎癥壞死牙髓及下方相對正常牙髓中均陽性表達，染色強度在損傷后的3、5、7d組牙髓組織中明顯高于對照組(P＜0.05)。
　　 3.所提取的大鼠牙髓組織總RNA的OD260/280值均在1.8～

5、2.0之間，具有良好的純度和完整性。熒光定量PCR檢測串珠素mRNA相對表達量，發(fā)現(xiàn)在牙髓損傷以后1d開始明顯下降，在3、5、7d組中逐漸回復，但仍低于對照組(P＜0.05)。β1整合素mRNA的相對表達量在1d組開始升高，各實驗組的相對表達量均明顯高于對照組(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.采用EDTA溶液加微波輻射對大鼠上頜骨磨牙聯(lián)合標本進行脫鈣能提高效率而不影響染色效果，可用于后續(xù)實驗中各標本的脫鈣。