銀杏葉提取物抑制高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞肥大和細胞外基質(zhì)的堆積.pdf

1、目的:1.研究銀杏葉提取物(extract of ginkgo biloba,GBE)對高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細胞(mesangial cell,MC)細胞周期的影響，進而明確其是否有抑制細胞肥大作用。 2.以卡托普利為對照藥，探索GBE對Ⅳ型膠原和層粘蛋白、Smad2／3蛋白、Smad7蛋白、TGF-β<,1>mRNA的影響，也即對TGF-β<,1>/Smads信號異常所致的細胞外基質(zhì)(extracellular matrix

2、，ECM)表達增多的作用。 3.探索GBE對高糖培養(yǎng)的MC氧化應激狀態(tài)的影響及后者與ECM的關系，從而進一步探索GBE對氧化應激與TGF-β<,1>／Smads信號異常這兩者引起的ECM堆積之間的關系。 方法: 1.大鼠腎小球系膜細胞株的培養(yǎng)。大鼠MC分為正常對照組、溶媒對照組、高糖組、GBE低濃度組，GBE中濃度組，GBE高濃度組，卡托普利對照組。 2.流式細胞術測定細胞周期。 3.免疫細胞化

3、學測定Smad2／3蛋白和Smad7蛋白。 4.放射免疫法測定細胞漿內(nèi)的Ⅳ型膠原和層粘蛋白(即ECM)。 5.RT-PCR法測定細胞TGF-β<,1>mRNA表達。 6可見光分光光度法測定胞漿CAT,GSH-Px,T-AOC和T-SOD四大抗氧化指標的水平。 結(jié)果： 1.與高糖組相比，GBE低中高濃度組的G<,o>／G<,1>期均有顯著降低，S期細胞比例也分別有不同程度的升高(P<0.05 or

4、P<0.01)，這種改變是濃度依賴性(│r│)0.999)。卡托普利組未見顯著性作用。 2.與高糖組相比，GBE低中高濃度組均大大降低了細胞內(nèi)Smad2／3蛋白的表達；高濃度組GBE顯著性增加細胞內(nèi)Smad7蛋白的表達(P<0.01)。GBE低中高濃度組層粘蛋白的表達有顯著性降低，與高糖組相比皆有顯著性差異(P<0.05 orP<0.01)；GBE中高濃度組的Ⅳ型膠原有顯著性降低。GBE高濃度組的TGF-β<,1>mRNA的表達

5、較高糖組顯著性降低(P<0.05)?？ㄍ衅绽M可明顯降低Ⅳ型膠原和層粘蛋白的含量及TGF-β<,1>RNA的含量(P<0.05 or P<0.01)。 3. GBE高和(或)中濃度組顯著提高了胞漿CAT，GSH-Px，T-AOC和T-SOD的水平，卡托普利僅提高CAT，GSH-Px的水平。 結(jié)論: 1. GBE在大鼠MC上具有升高細胞的S期百分數(shù)，從而抑制細胞肥大，具有保護細胞作用。 2.GBE能明顯抑制

6、高糖環(huán)境下TGF-β<,1>／Smads信號異常所致的Ⅳ型膠原和層粘蛋白的大量表達。 3.GBE有很強的抗氧化和抗纖維化能力。 4.GBE一方面通過其抗氧化作用抑制了TGF-β<,1>／Smads信號的異常；另一方面通過其抑制TGF-β<,1>／Smads信號作用而抑制氧化應激的產(chǎn)生，兩者共同抑制了ECM的表達。 總之，相對于對照藥卡托普利，GBE對以上指標的作用更為廣泛。GBE能抑制高糖培養(yǎng)的MC的肥大和ECM