LPS及TOLL樣受體4阻斷劑對(duì)蛻膜細(xì)胞中PR及IL-1β、COX-2影響的研究.pdf

1、目的:
　　 旨在研究脂多糖(LPS)及其拮抗劑TOLL樣受體4阻斷劑(TLR4mAb)作用于體外培養(yǎng)的蛻膜細(xì)胞后孕激素受體(PR)、IL-1β及COX-2的表達(dá)情況，以探討脂多糖及其拮抗劑對(duì)蛻膜細(xì)胞中孕激素受體的影響，和孕激素受體與炎癥因子之間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 分離培養(yǎng)人早孕蛻膜細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞傳代至3-4代時(shí)，采用HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)、免疫熒光技術(shù)鑒別細(xì)胞純度，將蛻膜細(xì)胞隨機(jī)分為6組:分別用0ug/m

2、l、1ug/ml和3ug/ml終濃度TLR4mAb各2孔預(yù)處理細(xì)胞24小時(shí)，再用0ng/ml、100ng/mlLPS分別加入三組TLR4mAb中作用24小時(shí)。用MTT技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞存活及生長(zhǎng)率、RT-PCR半定量技術(shù)，檢測(cè)PR、IL-1β及COX-2mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.免疫熒光示，蛻膜細(xì)胞傳到3-4代時(shí)體積較第一代增大，胞核更明顯且純度更高，鏡下形態(tài)一致性高。
　　 2.MTT實(shí)驗(yàn)示，與對(duì)

3、照組比較LPS抑制細(xì)胞生長(zhǎng)(P＜0.05);TLR4mAb促進(jìn)細(xì)胞增殖，且一定濃度的TLR4mAb能夠在一定程度上拮抗LPS對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.RT-PCR實(shí)驗(yàn)示:
　　 (1)LPS使蛻膜細(xì)胞中PRmRNA的表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，使IL-1β和COX-2mRNA的表達(dá)上調(diào)(P＜0.05);
　　 (2)TLR4mAb使蛻膜細(xì)胞中PR和COX-2mRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義(P＞0.05)，使IL-1βmRNA的表達(dá)下調(diào)(P＜0.05);
　　 (3)TLR4mAb則使LPS作用后的蛻膜細(xì)胞中PRmRNA的表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)、IL-1βmRNA的表達(dá)下調(diào)(P＜0.05);高濃度TLR4mAb使COX-2mRNA的表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 LPS作用于體外培養(yǎng)的人蛻膜細(xì)胞后，PRmRNA表達(dá)下調(diào);IL-1β、COX-2的mRNA表達(dá)增加;使用TOLL