生酮高脂飲食對(duì)大鼠正常生長(zhǎng)及傳統(tǒng)高脂飲食對(duì)Sirt1通路影響的研究.pdf

1、本研究觀察了生酮高脂飲食對(duì)正常大鼠生長(zhǎng)、代謝和運(yùn)動(dòng)能力的影響，另外還利用傳統(tǒng)高脂飲食制造肥胖傾向和肥胖抵抗動(dòng)物模型，比較高脂肪高能量條件對(duì)Sirt1通路的影響，為探索新的肥胖防治途徑提供科學(xué)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)材料與方法： 1、德國(guó)Harlan-Winkelman公司提供健康成年雄性Wistar大鼠23只，隨機(jī)按體重分為2組(11只生酮飲食組和12只對(duì)照組)。每日根據(jù)對(duì)照組每日平均能量攝入量給予生酮飲食組含同等能量的生酮飲食。配

2、對(duì)喂養(yǎng)10天后開始訓(xùn)練大鼠運(yùn)動(dòng)，每日在黑夜時(shí)相使大鼠被迫在勻速轉(zhuǎn)動(dòng)的輪子內(nèi)跑步。 (1) 訓(xùn)練原則：人為控制轉(zhuǎn)速與時(shí)間，來確保兩組動(dòng)物在規(guī)定時(shí)間內(nèi)的運(yùn)動(dòng)量一致。每日訓(xùn)練大鼠被迫跑步，每3天一個(gè)周期增加訓(xùn)練時(shí)間或者輪子轉(zhuǎn)速，來逐漸增加大鼠的運(yùn)動(dòng)量。訓(xùn)練3周后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行耐力測(cè)試。 (2) 耐力測(cè)試的原則為：①動(dòng)物始終被迫在一個(gè)固定轉(zhuǎn)速的輪子上跑步，直至筋疲力盡；②筋疲力盡狀態(tài)指的是動(dòng)物的跑動(dòng)不能跟上輪子的轉(zhuǎn)動(dòng)：③動(dòng)物在筋疲

3、力盡時(shí)的表現(xiàn)可為前后肢的動(dòng)作不能協(xié)調(diào)，如：后肢拖拽在身體后；④3分鐘內(nèi)動(dòng)物被輪子甩下5次，曾現(xiàn)“滾筒洗衣機(jī)”狀態(tài)；⑤2名操作者同時(shí)判斷，意見達(dá)成一致，終止測(cè)試。 (3)間接法測(cè)定代謝率在配對(duì)喂養(yǎng)前1天將所有動(dòng)物送入CaloSys系統(tǒng)1小時(shí)，檢測(cè)動(dòng)物基礎(chǔ)水平的靜息代謝率，于配對(duì)喂養(yǎng)第4天、第9天再次將所有動(dòng)物送入CaloSys系統(tǒng)2小時(shí)，檢測(cè)接受生酮飼料4天、9天后的靜息代謝率。此外，在訓(xùn)練階段，每日有4只動(dòng)物于訓(xùn)練后立即送入Ca

4、loSys系統(tǒng)，監(jiān)測(cè)運(yùn)動(dòng)后16-22小時(shí)的代謝水平。在耐力測(cè)試階段，將動(dòng)物送入CaloSys系統(tǒng)，同時(shí)監(jiān)測(cè)代謝水平。 (4) 標(biāo)本的采集與保存耐力測(cè)試結(jié)束后恢復(fù)2天，動(dòng)物禁食6小時(shí)后，乙醚麻醉，斷頭處死，留血分離出血清，密封于-80℃凍存。應(yīng)用放射免疫法測(cè)血胰島素水平。 2、由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供健康斷乳雄性Wistar幼年大鼠30只，自行配制高脂飼料，基礎(chǔ)飼料由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。 (1) 動(dòng)物的

5、分組與飼養(yǎng)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機(jī)按體重分為2組(高脂組和對(duì)照組)，20只給予高脂飼料，10只給予正常飼料，兩組動(dòng)物均自由進(jìn)食水，每日紀(jì)錄體重和進(jìn)食量，喂養(yǎng)4周。 (2) OP與OR鼠的判定實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)高脂組按體重由高至低排序，體重位于上游的前1/3大鼠判定為肥胖傾向大鼠，體重位于下游的后1/3大鼠判定為肥胖抵抗大鼠。 (3) 標(biāo)本的采集與處理動(dòng)物乙醚麻醉后斷頭處死，剝離全部附睪周、腎周脂肪墊并稱重，另取少量腹部皮下脂肪組

6、織迅速于-70℃凍存。 (4) 指標(biāo)的檢測(cè)Sirt1 及其下游轉(zhuǎn)錄因子叉頭轉(zhuǎn)錄因子O1(forkhead transcription factor 1，F(xiàn)OXO1)和過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator activatedreceptor γ，PPARγ)的mRNA測(cè)定采用RT-PCR法，PPAR?蛋白測(cè)定采用Western-blot法。 3、統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS軟件分析。

7、 研究結(jié)果： 1、生酮飼料喂養(yǎng)正常大鼠，導(dǎo)致體重生長(zhǎng)落后于對(duì)照組。兩組間血總蛋白水平無顯著差異，生酮飼料組的白蛋白水平高于對(duì)照組。單純應(yīng)用生酮飼料干預(yù)大鼠，具有降低總膽固醇和胰島素水平的作用，但使甘油三酯含量顯著高于對(duì)照組。被迫運(yùn)動(dòng)造成大鼠進(jìn)食量下降，但未影響動(dòng)物正常生長(zhǎng)。生酮飼料使動(dòng)物呼吸商下降，雖然總的代謝率水平差異不顯著，但生酮飼料組動(dòng)物運(yùn)動(dòng)后2小時(shí)內(nèi)的代謝水平顯著高于對(duì)照組。比較生酮飼料喂養(yǎng)大鼠與正常大鼠耐力測(cè)試結(jié)果差

8、異不顯著。 2、傳統(tǒng)高脂飼料喂養(yǎng)大鼠，有肥胖傾向與肥胖抵抗現(xiàn)象，體重出現(xiàn)顯著性差異。mRNA表達(dá)半定量分析結(jié)果顯示，肥胖傾向與肥胖抵抗大鼠皮下與內(nèi)臟白色脂肪中的Sirtl、FOXO1和PPARγ的mRNA表達(dá)水平差異不顯著，同時(shí)都低于對(duì)照組?？偟膩砜?，肥胖傾向與肥胖抵抗大鼠的PPARγ蛋白水平差別不大，但高脂飼料喂養(yǎng)動(dòng)物皮下脂肪中的PPARγ蛋白水平都顯著低于對(duì)照組，內(nèi)臟脂肪中的PPARγ蛋白水平都顯著高于對(duì)照組。 研究

9、結(jié)論： 1、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在等能量配對(duì)喂養(yǎng)條件下，用生酮高脂飲食干預(yù)正常大鼠，可能通過提高運(yùn)動(dòng)后代謝水平途徑起到減緩體重增長(zhǎng)的作用，同時(shí)生酮飲食對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響不大，提示，應(yīng)用生酮飲食結(jié)合適當(dāng)鍛煉可作為調(diào)節(jié)體重的有效方法之一。另外在干預(yù)時(shí)應(yīng)注意所用脂肪的類型。 2、傳統(tǒng)高脂高能量飲食對(duì)大鼠Sirt1、FOXO1和PPAR γ的mRNA表達(dá)有抑制作用，調(diào)節(jié)Sirt1/FOXO1通路可成為預(yù)防肥胖的潛在的作用靶點(diǎn)。傳統(tǒng)高