母鼠孕前慢性應(yīng)激對哺乳后母鼠及其子代行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)影響.pdf

1、背景與目的：
　　近年來，對孕期慢性應(yīng)激研究的比較多，它可能會對母體本身以及子代產(chǎn)生負性的影響，許多研究指出孕期應(yīng)激和抑郁會增加母體產(chǎn)后抑郁的發(fā)生率，孕期應(yīng)激和抑郁會造成許多不良的妊娠結(jié)局，如產(chǎn)前生長延遲、早產(chǎn)、產(chǎn)后低體重兒等，孕期應(yīng)激還增加子代情感障礙的發(fā)生，許多動物實驗表明孕期應(yīng)激與子代增多的抑郁樣行為和焦慮樣行為有關(guān)。孕期應(yīng)激和抑郁可能通過影響HPA軸的功能、5-HT系統(tǒng)和海馬區(qū)的細胞再生對子代產(chǎn)生影響。然而對母體孕前慢性應(yīng)

2、激和抑郁對子代的行為學(xué)和相關(guān)神經(jīng)生物學(xué)機制的影響的研究還較少。
　　大腦海馬對應(yīng)激和增加的糖皮質(zhì)激素很敏感，容易受影響。大量的臨床研究證實應(yīng)激可以抑制海馬神經(jīng)再生，腦內(nèi)海馬區(qū)新生神經(jīng)元的產(chǎn)生減少會導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生，而抗抑郁藥能夠促進海馬神經(jīng)元再生。
　　本研究擬通過母鼠孕前慢性應(yīng)激抑郁模型探討母鼠及其子代行為學(xué)和海馬區(qū)神經(jīng)元再生的變化，以及海馬神經(jīng)元再生與子代行為學(xué)變化的關(guān)系。
　　材料與方法：
　　從汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)

3、院實驗動物中心（汕頭，中國）取2月齡性成熟期的雌性Spraguedawley（SD）大鼠，體重180g-220g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周室溫保持在22±1℃、12h：12h光照-黑暗循環(huán)、自由進食水。慢性應(yīng)激：將大鼠隨機分為四組分別為孕前慢性應(yīng)激+妊娠組（CUS+Pre）12只、孕前慢性應(yīng)激+非妊娠組（CUS）12只、非應(yīng)激+妊娠組（CUS+Pre）10只、非應(yīng)激組+非妊娠組（CON）10只。非應(yīng)激+妊娠組和非應(yīng)激+不孕組大鼠每日單籠飼養(yǎng)，應(yīng)激

4、+妊娠組和應(yīng)激+非妊娠組按照21d慢性不可預(yù)見性應(yīng)激方案執(zhí)行，為保證應(yīng)激的不可預(yù)見性，應(yīng)激的種類隨機安排并且最后是禁食、禁水，單籠飼養(yǎng)。大鼠生產(chǎn)繁殖和子代飼養(yǎng)：慢性應(yīng)激10天后采用一雄多雌（1:3）間隔同居法繁殖，即每天20:00合籠進行交配，次日8:00分開單籠飼養(yǎng)，每日以此方法直至懷孕（以觀察到明顯的腹部隆起為準），子鼠出生后由其母哺乳喂養(yǎng)，生后22d斷奶，分別取哺乳后母鼠、1月齡和2月齡的子鼠進行行為學(xué)實驗。由于子代雄鼠數(shù)量少，故

5、雄性子鼠僅分配到2月齡組。大鼠處死前，腹腔注射BrdU，100mg/Kg，每間隔2h注射一次，共注射4次，最后一次注射兩小時后以生理鹽水和4％多聚甲醛心臟灌注，取腦組織制作冰凍切片，檢測子代鼠大腦海馬神經(jīng)前體細胞的增殖，實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用Excel2003和SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結(jié)果以均數(shù)±標準差（`x_±SD）表示，采用單因素方差分析、t檢驗、重復(fù)測量的方差分析和非參數(shù)檢驗進行比較，以P≤0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P≤

6、0.01為差別有高度統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.開場試驗
　　1.1母鼠
　　母鼠應(yīng)激后應(yīng)激組與非應(yīng)激組相比總路程、中央路程、周邊路程差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05,獨立樣本T檢驗），應(yīng)激組總路程、中央路程、周邊路程增加。
　　母鼠哺乳期過后應(yīng)激+妊娠組、應(yīng)激+非妊娠組、非應(yīng)激+妊娠組和非應(yīng)激+非妊娠組各組總路程相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOVA），應(yīng)激+妊娠組與非應(yīng)激+妊娠組總路程相比差

7、別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOVA），總路程增加；應(yīng)激+非妊娠組與應(yīng)激+妊娠組總路程相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOVA），總路程增加；應(yīng)激+非妊娠組與非應(yīng)激+妊娠組總路程相比差別有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.01，ANOVA），總路程明顯增加；非應(yīng)激+非妊娠組與非應(yīng)激+妊娠組相比總路程差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOVA），總路程增加；應(yīng)激+非妊娠組與非應(yīng)激+非妊娠組總路程相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOV

8、A），總路程增加。
　　1.2子鼠
　　一月齡雌鼠應(yīng)激+妊娠組與非應(yīng)激+妊娠組總路程、中央路程和周邊路程相比無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，獨立樣本T檢驗）。
　　二月齡應(yīng)激+妊娠組雌鼠與雄鼠總路程、周邊路程相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOVA），總路程和周邊路程增加；應(yīng)激組雌鼠與非應(yīng)激組雄性相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，ANOVA），總路程和周邊路程增加。
　　2.蔗糖水消耗試驗
　　2.1母

9、鼠
　　母鼠應(yīng)激后，應(yīng)激組和非應(yīng)激組相比蔗糖水消耗量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，獨立樣本T檢驗），應(yīng)激組的消耗量低于非應(yīng)激組；蔗糖水消耗百分比差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.01，獨立樣本T檢驗），應(yīng)激組的消耗百分比明顯的低于非應(yīng)激組。
　　母鼠哺乳結(jié)束之后后應(yīng)激+妊娠組、應(yīng)激+非妊娠組、非應(yīng)激+妊娠組和非應(yīng)激+非妊娠組各組相比蔗糖水消耗量、蔗糖水消耗百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，ANOVA）。
　　2.2子

10、鼠
　　一月齡子代雌性鼠應(yīng)激+妊娠組和非應(yīng)激+妊娠組相比蔗糖水消耗量、蔗糖水消耗百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，獨立樣本T檢驗）。
　　二月齡子代鼠應(yīng)激+妊娠組的雌鼠和雄鼠與非應(yīng)激+妊娠組的雌鼠和雄鼠相比蔗糖水消耗量、蔗糖水消耗百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，ANOVA）。
　　3.強迫游泳實驗
　　3.1母鼠
　　母鼠應(yīng)激后應(yīng)激組與非應(yīng)激組相比5min的強迫游泳中不動時間明顯增加，差別有統(tǒng)計學(xué)

11、意義（P≤0.05，獨立樣本T檢驗）。
　　4.水迷宮實驗
　　4.1母鼠
　　母鼠應(yīng)激后應(yīng)激組與非應(yīng)激組穿越平臺次數(shù)相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P≤0.05，獨立樣本T檢驗），穿越平臺次數(shù)增加。母鼠哺乳期結(jié)束后應(yīng)激+妊娠組、應(yīng)激+非妊娠組、非應(yīng)激+妊娠組和非應(yīng)激+非妊娠組相比穿越平臺的次數(shù)差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，ANOVA）。
　　4.2子鼠
　　一月齡雌鼠應(yīng)激+妊娠組和非應(yīng)激+妊娠組相比穿越平臺的次數(shù)

12、差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，獨立樣本T檢驗）。二月齡子代鼠應(yīng)激+妊娠組的雌鼠和雄鼠與非應(yīng)激+妊娠組的雌鼠和雄鼠相比穿越平臺的次數(shù)差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，ANOVA）。
　　5.免疫組織化學(xué)
　　5.1二月齡子鼠
　　應(yīng)激組雌鼠、應(yīng)激組雄鼠、非應(yīng)激組雌鼠、非應(yīng)激組雄鼠4組相比較腦組織單位海馬齒狀回面積內(nèi)BrdU陽性細胞數(shù)差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05，ANOVA）。
　　結(jié)論：
　　1、孕前21

13、d慢性不可預(yù)測性應(yīng)激致母鼠產(chǎn)生焦慮樣行為、抑郁樣行為，提示不良應(yīng)激是焦慮癥和抑郁癥主要的誘因之一；母鼠產(chǎn)后22d抑郁樣行為消失，而焦慮樣行為仍然存在，提示應(yīng)激所致的焦慮樣行為持續(xù)時間較長。
　　2、我們推斷雌激素等性激素在空間記憶保持的過程中起重要的作用，應(yīng)激所致空間記憶的變化在哺乳結(jié)束后恢復(fù)正常。
　　3、應(yīng)激對子鼠的行為學(xué)未產(chǎn)生明顯的影響，但是在二月齡子鼠在焦慮樣行為中所表現(xiàn)出的雌雄差異，提示成年后性激素在焦慮癥的病因?qū)W