局部低溫對兔骨骼肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、背景與目的:下肢的動脈阻塞性疾病伴隨著動脈硬化性疾病發(fā)病率的增長也與日劇增。Fogarty導管的臨床推廣及球囊擴張導管等介入技術的廣泛推廣應用，可使血流灌注快速、安全恢復，極大的推動了急性肢體缺血的治療。雖然快速恢復缺血器官的血流灌注是首要的，但它卻可導致“缺血再灌注損傷”(Ischemia Reperfusion Injury，IRI)，從而加劇局部損傷并能引起全身并發(fā)癥，使病人臨床預后轉(zhuǎn)差。如何降低缺血再灌注損傷的發(fā)生是目前基礎和臨

2、床研究的熱點。大量的研究表明，在伴隨缺血再灌注損傷過程中產(chǎn)生的自由基、炎癥細胞浸潤、內(nèi)皮細胞功能障礙等與骨骼肌的損傷密切相關。局部的低溫對減少自由基的釋放、降低炎癥細胞的浸潤、保護內(nèi)皮細胞的功能國外已進行了相關的實驗研究。并已經(jīng)應用在腦梗死的治療，通過抑制腦部水腫、改善神經(jīng)元的缺失、抑制遲發(fā)的神經(jīng)元死亡，取得了一定的療效。本實驗通過建立兔后肢缺血再灌注模型，探討局部低溫對缺血再灌注損傷的保護作用，為缺血再灌注損傷提供新的防治途徑。

3、>　　 方法:取成年兔36只，雌雄不限，體重2-2.5kg，隨機分成A、B、C、D、E、F組6組，每組6只。實驗動物于手術前12小時禁食水，術前耳緣靜脈推注3％水合氯醛5ml/kg麻醉，麻醉成功后將動物仰臥位固定于手術臺上。沿股神經(jīng)血管走行方向縱行切開皮膚長約6cm，逐層分離顯露股神經(jīng)血管束，游離股神經(jīng)及動靜脈約5cm。利用無創(chuàng)血管夾夾閉股動脈，自制止血帶置于股動脈、股靜脈和股神經(jīng)下方阻斷側(cè)枝循環(huán)，并保持股靜脈回流通暢，建立模型。A組

4、為空白組，B組為IRI組，C組為再灌注后局部溫度為10℃組，D組為再灌注后局部溫度為15℃組，E組為再灌注后局溫度控制為20℃組，F(xiàn)組為再灌注后局部溫度控制為25℃組。血流阻斷時間為4小時。上述B、C、D、E、F組再灌注后1小時、2小時、4小時、8小時、12小時給予右心房穿刺取血，全自動生化分析儀檢測血清中肌酸激酶(creatine kinase CK)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase LDH)水平;比色法測定血

5、清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase SOD)、丙二醛(malondialdehyde MDA)的活性。于4小時取缺血再灌注后肢的脛肌組織約0.6g，其中0.3g左右修剪后放于事先注滿福爾馬林溶液試管，等待HE染色，觀察組織細微結(jié)構(gòu)變化，其余肌肉組織用于檢測肌肉濕干比(W/D)。
　　 結(jié)果:
　　 1、再灌注后血清中LDH、CK、SOD、MDA水平的比較
　　 再灌注4小時后血清中LDH

6、、CK、MDA水平經(jīng)統(tǒng)計比較，A組各時間點無明顯差異(P＞0.05);C組、D組和E組與B組比較水平下降，有顯著統(tǒng)計學差異，(P＜0.05)。F組各時間點與B組比較水平上升(P＜0.05)。SOD水平經(jīng)統(tǒng)計學比較A組各時間點無明顯差異(P＞0.05);B組各時間點水平較其它實驗組均低，在4小時時達到最低值為219.27±24.91，C組、D組、E組和F組與B組比較各時間點都有不同程度的上升(P＜0.05)。
　　 2、肌肉干濕比

7、的比較
　　 再灌注后4h后，與A組相比各實驗組肌肉均有不同程度的水腫(P＜0.01)。C組再灌注4h后肌肉濕干比為4.78±0.87，較其它各實驗組均低，肌肉水腫程度最輕，差異有顯著性意義(P＜0.05)。F組再灌注4h后肌肉濕干比為6.07±0.63，較其它各實驗組均高，肌肉水腫程度最重，差異有顯著性統(tǒng)計意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:局部低溫對兔骨骼肌缺血再灌注損傷有顯著的保護作用，局部溫度為10℃左右時保護作