SIRT5對STAT3的乙?；{節(jié)及其功能的研究.pdf

1、STAT3是細胞因子和生長因子受體的胞質轉錄因子。當細胞因子與JAK相連受體結合時,JAK通過自身磷酸化而被激活,激活后的JAK可磷酸化一個或多個受體位點并呈遞給STAT3結合,隨后STAT3發(fā)生Tyr705和Ser727位點的磷酸化并從受體上解離,而后轉移至細胞核中調控基因表達。近來有研究表明STAT3的Lys685會發(fā)生乙酰化修飾,并且對它二聚體的穩(wěn)定形成和促進基因轉錄非常重要。
　　 為了進一步研究STAT3的乙?；c磷酸

2、化修飾之間的關系和對STAT3活性調節(jié)的重要性,我們首先構建了STFAT3的一系列突變體,然后應用Western blot和熒光素酶報告基因檢測等方法得出STAT3的Lys383、Lys707、Lys709位也可以發(fā)生乙酰化修飾。并且當Lys709突變之后,STAT3Tyr705的磷酸化幾乎消失,證明乙?；瘜α姿峄瞧鹫{節(jié)作用的。另外,CBP可以增強STAT3Ser727的磷酸化,增強STAT3的轉錄活性。STAT3乙?；稽c突變之后自

3、身的轉錄活性降低,因此乙?；瘜TAT3的轉錄活性是有貢獻的。
　　 SIRT5是屬于ClassⅢ的HDACs,研究表明SIRT5定位于線粒體中,而且可以調節(jié)CSP1的去乙?；?但是其它的生物學功能和特性并不明確。為了探究SIRT家族是否參與STAT3的去乙酰化調節(jié),我們用SIRT家族的siRNA實驗和在293T細胞中的過表達實驗篩選出SIRT1,SIRT5,SIRT7可以使STAT3去乙?；?其中SIRT1,SIRT5可以完全

4、逆轉CBP對STAT3的乙酰化,而SIRT7只能部分逆轉。通過熒光素酶報告基因檢測,發(fā)現(xiàn)SIRT1、SIRT5、SIRT7可以使得STAT3的轉錄活性降低,其中SIRT7對STAT3活性降低的影響最為明顯,SIRT5最小,SIRT1居于兩者之間。我們還通過實驗證實去乙?；窼IRT5可以被CBP/p300乙?；?并初步得出結論過表達后的SIRT‘5沒有轉移到細胞核中。這些結論對今后更好地研究SIRT5的生物學特性以及對STAT3的調節(jié)機