尼莫地平加強(qiáng)阿糖胞苷誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的研究尼莫地平(nimodipine NMDP)在加強(qiáng)阿糖胞苷(cytarabine Ara-c)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制.為尼莫地平在臨床上逆轉(zhuǎn)白血病耐藥提供理論依據(jù).方法取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞株,隨機(jī)分為一個(gè)空白對(duì)照組(A)和三個(gè)不同實(shí)驗(yàn)組(B:NMDP、C:Ara-c、D:NMDP+Ara-c),于不同培養(yǎng)時(shí)間取HL-60細(xì)胞進(jìn)行Giemsa染色,光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化.并在同期提取HL-60細(xì)胞的DN

2、A,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)凋亡細(xì)胞的DNA碎片.同時(shí)采用細(xì)胞免疫組化方法檢測(cè)凋亡細(xì)胞的凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax的蛋白表達(dá).結(jié)果A組細(xì)胞24小時(shí)無(wú)變化.實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞自培養(yǎng)8小時(shí)起,HL-60細(xì)胞可見(jiàn)不同程度的變形、體積變小、出泡,小泡散落于細(xì)胞周圍.細(xì)胞和小泡仍保持膜的完整性.隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),出泡細(xì)胞增加,細(xì)胞體積變小,密度減少,且伴有細(xì)胞壞死現(xiàn)象.Giemsa染色可見(jiàn)核膜裂解,染色質(zhì)呈紫紅色或藍(lán)紫色,分割成塊狀,濃縮、靠近核膜,呈邊集

3、現(xiàn)象,并具有典型的凋亡小體形成.瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)典型的DNA梯形凋亡帶.Bcl-2蛋白表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降,在8h時(shí)D組明顯低于A組(P<0.5).16h時(shí)實(shí)驗(yàn)組均低于A組,實(shí)驗(yàn)組D和B、C之間差異也有差異.24h時(shí)實(shí)驗(yàn)組D和B間仍有差異(P<0.05).Bax蛋白的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加,8小時(shí)C、D組明顯高于A組,出現(xiàn)差異(P<0.05),24小時(shí)各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間有顯著差異(P<0.01),但各實(shí)驗(yàn)組在同一時(shí)

4、間內(nèi)無(wú)明顯差別(P>0.05).Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),對(duì)照組Bcl-2/Bax比值無(wú)明顯變化(P>0.05);而實(shí)驗(yàn)組Bcl-2/Bax比值逐漸下降,8小時(shí)與對(duì)照組出現(xiàn)差異(P<0.05),其中A組和D組間有顯著差異(P<0.01).16小時(shí)D和B、C組間也有差異(P<0.05),24小時(shí)各實(shí)驗(yàn)組間無(wú)明顯差異(P>0.05).結(jié)論1.尼莫地平具有誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的作用,Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)和Bax蛋白表達(dá)上