曲古抑菌素A對(duì)喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞的凋亡作用及相關(guān)分子機(jī)制.pdf

1、目的:
　　研究組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)對(duì)人喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、人類喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞的維持及擴(kuò)大培養(yǎng)。
　　2、應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)不同濃度(0.2、0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L) TSA對(duì)喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞增殖的抑制作用并計(jì)算24小時(shí)半數(shù)抑制率(IC50)
　　3、

2、應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)技術(shù)研究TSA對(duì)喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2凋亡的影響。
　　4、采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)Bcl-2、Bax、C-myc、Survivin、 mTOR、p70S6K基因的表達(dá)。
　　5、運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2、Bax、p70S6K蛋白含量的表達(dá)。
　　6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:不同濃度曲古抑菌素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制采用One-wayANOVA方差分析，P＜0.05是認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

3、。
　　結(jié)果:
　　1、Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞生長(zhǎng)良好呈貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)迅速，3天傳代一次，細(xì)胞生長(zhǎng)密集時(shí)可呈多層重疊生長(zhǎng)，取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)良好的細(xì)胞進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)。
　　2、CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示不同藥物濃度組均可抑制Hep-2細(xì)胞的生長(zhǎng)，且呈劑量依賴性，各實(shí)驗(yàn)組之間及實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。TSA作用于Hep-2細(xì)胞24小時(shí)的IC50值為2.0μmol·L-1。
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4、、流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)經(jīng)不同濃度TSA作用24小時(shí)后，Hep-2細(xì)胞凋亡率(1.07％、2.45％、9.31％、15.32％)隨TSA作用濃度(0、0.2、1.0、2.0μmol/L)升高而增高，且具有濃度依賴性。
　　4、RT-PCR檢測(cè)表明，經(jīng)不同濃度TSA作用24小時(shí)后，Hep-2細(xì)胞的Bcl-2、C-myc、Survivin mRNA的表達(dá)隨TSA濃度增加而下降，Bax、mTOR、p70S6K mRNA的表達(dá)則隨

5、TSA濃度增加而增加(p＜0.05)。
　　5、Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)TSA作用24小時(shí)后，Hep-2細(xì)胞的Bcl-2蛋白表達(dá)隨TSA濃度增加而下降，Bax、p70S6K蛋白表達(dá)隨TSA濃度增加而增加(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、TSA能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞凋亡，且隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞凋亡率增大，具有濃度依賴性。
　　2、TSA對(duì)Hep-2細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋