新的腫瘤抗原OVA12的生物學(xué)功能和致瘤機制研究.pdf

1、腫瘤抗原OVA12是本實驗室應(yīng)用SEREX(Serological analysis of recombinantcDNA expression library)方法從人卵巢癌cDNA表達文庫篩選得到的一個新的CT(cancer/testis)抗原。前期研究表明，OVA12抗原在多種腫瘤組織和腫瘤細胞株中高表達，在正常組織（睪丸除外）及正常細胞株中不表達或低表達;將OVA12基因轉(zhuǎn)染SMMC-7721細胞后，細胞增殖速度加快，裸鼠體內(nèi)成

2、瘤能力增強。結(jié)果顯示OVA12與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切的關(guān)聯(lián)，因此對OVA12生物學(xué)功能和作用機制的深入研究有著重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。本課題主要從以下三個方面進行研究:1）從mRNA及蛋白水平檢測多種正常和腫瘤細胞及組織中OVA12的表達水平，明確其表達譜特征;應(yīng)用病毒感染的方式構(gòu)建OVA12穩(wěn)定高表達及干擾細胞株，通過體內(nèi)外實驗進一步探討OVA12在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能。結(jié)果顯示OVA12在多種腫瘤組織和細胞株中高表達，

3、而在正常組織和細胞中不表達或低表達。體內(nèi)外結(jié)果證實OVA12在腫瘤細胞株高表達或者干擾后能夠顯著促進或抑制腫瘤細胞增殖能力及抗凋亡能力，并能通過上調(diào)Mcl-1和survivin蛋白的表達增加腫瘤細胞對5-FU的耐藥性;2）以O(shè)VA12穩(wěn)定高表達和干擾細胞株為研究對象，檢測與細胞增殖、凋亡密切相關(guān)的信號分子的表達變化。結(jié)果顯示OVA12表達降低能夠顯著提高p53蛋白的表達，而OVA12高表達能夠抑制p53蛋白的表達，但不影響p53 mRN

4、A水平;與對照組相比，p53熒光素酶基因報告系統(tǒng)檢測顯示OVA12干擾細胞株p53轉(zhuǎn)錄活性明顯增加，而OVA12高表達細胞株其轉(zhuǎn)錄活性顯著降低。OVA12能夠調(diào)控p53蛋白的K48位多聚泛素鏈形式，促進p53在蛋白酶體的泛素化降解，并能夠影響腫瘤細胞對抗腫瘤藥物順鉑（依賴p53信號通路誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡）的敏感性。結(jié)果提示OVA12蛋白能夠負向調(diào)控p53蛋白;3）利用特異性的p53 shRNA干擾阻斷p53信號通路，應(yīng)用CCK-8等相關(guān)體

5、內(nèi)外實驗方法檢測p53蛋白表達降低后對OVA12生物學(xué)功能的影響，同時檢測調(diào)控p53信號通路上游的多個重要蛋白表達變化，探討OVA12調(diào)控p53信號通路的作用機制。結(jié)果顯示與對照組相比，在OVA12干擾細胞株內(nèi)，特異性阻斷p53信號通路能有效的逆轉(zhuǎn)OVA12表達降低所導(dǎo)致的細胞增殖能力降低、G1/S期阻滯等生物學(xué)行為，體內(nèi)裸鼠成瘤實驗與體外實驗結(jié)果一致，證實OVA12發(fā)揮其生物學(xué)功能依賴于p53信號通路;OVA12能夠影響腫瘤抑癌基因p