γH2AX對膠質瘤放射敏感性預測效果的實驗研究.pdf

1、目的:神經膠質瘤為顱內常見腫瘤，為預后較差的顱內原發(fā)性惡性腫瘤，具有浸潤性生長和邊界不清等生物學特點，手術難以徹底切除。術后放射治療是膠質瘤綜合治療中較為重要的手段。但是惡性膠質瘤具有放射抗性致其放射治療效果欠佳，近來多個研究證實γH2AX逐漸成為檢測DNA雙鏈斷裂的一項新型生物學標志。在本研究中，我們通過體外培養(yǎng)高級別膠質瘤細胞系(U87、U251和LN229)，研究其放射敏感性以及經X射線照射后三種細胞株γH2AX蛋白的表達變化，并

2、分析γH2AX蛋白表達與膠質瘤細胞放射敏感性之間的相互關系。
　　方法:
　　1.選擇高級別人腦膠質瘤U87、U251和LN229細胞株，分成0Gy組、2Gy組、4Gy組、6Gy組、8Gy組和10Gy組，經常規(guī)細胞培養(yǎng)、細胞計數后，行X線照射，繼續(xù)細胞培養(yǎng)2周左后，經固定、染色后鏡下檢測細胞集落數，計算細胞克隆形成率、細胞存活分數，并繪制細胞存活曲線、由生物學參數比較細胞系間放射敏感性;
　　2.選擇高級別人腦膠質瘤U

3、87、U251和LN229細胞株，按照經X線照射后培養(yǎng)的時間分為0h組、0.5h組、1h組、2h組、6h組、12h組、24h組、36h組和48h組，常規(guī)細胞培養(yǎng)至細胞貼壁并鋪滿整個培養(yǎng)瓶約75％體積時，行2Gy照射，然后放置于細胞培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)0h、0.5h、1h、2h、6h、12h、24h、36h和48h，依次分別提取制備細胞總蛋白，經蛋白變性、聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、蛋白質轉移至PVDF膜、封閉、Ⅰ抗反應、Ⅱ抗孵育后，ECL化學發(fā)

4、光試劑盒顯影。采用Alpha Innotech凝膠成像儀檢測結果，Image J計算各電泳條帶平均光密度值，從而檢測其γH2AX蛋白表達變化。目的蛋白質相對表達量=目的條帶灰度值/同一樣本內參灰度值。
　　3.統計學分析γH2AX蛋白表達與膠質瘤細胞放射敏感性之間的相關性。以Western blotting條帶中6h組與0.5h組的蛋白表達量差值代表相對衰減速度，以目的蛋白質峰值與初始值之間差值代表目的蛋白升高程度，分別與放射增敏

5、比行相關性分析。
　　結果:
　　1.細胞克隆形成實驗顯示，隨著X線照射劑量的增加，膠質瘤細胞存活分數逐漸降低，細胞克隆形成率減少，U87、LN229、U251細胞的放射增敏比(SER)依次為1.31±0.04、1.14±0.02、1.00±0.00，并采用單因素方差分析得出:放射增敏比(SER)自高至低依次為U87、LN229、U251（均P=0.000）;
　　2.Western blotting法顯示，隨著經X線

6、照射后培養(yǎng)時間的延長，各膠質瘤細胞系γH2AX蛋白表達呈現出先上升后下降的時間效應曲線，U87、LN229和U251細胞株出現峰值時間依次為2h、1h和1h(P=0.000、0.000、0.015)。
　　3.γH2AX蛋白相對衰減速度和γH2AX升高程度均與放射增敏比呈正相關。(r=0.733, p=0.025;r=0.672,P=0.047)。
　　結論:
　　1.三種高級別人腦膠質瘤細胞株放射敏感性自高至低依次為