HAS-2沉默對大腸癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、目的：
　　本研究主要探討HAS-2沉默前后對大腸癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響以及HAS-2沉默前后對TGF-β調(diào)控EMT的影響。
　　方法：
　　帶FAM熒光標記的陰性對照siRNA轉(zhuǎn)染細胞后，用流式細胞儀檢測siRNA轉(zhuǎn)染效率，篩選最佳轉(zhuǎn)染條件。之后用Real time PCR和Western blot分別從mRNA和蛋白水平檢測HAS-2 siRNA干擾效率。用Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后E-Cad

2、herin、Vimentin、Slug蛋白表達水平變化，用Real time PCR檢測轉(zhuǎn)染前后E-Cadherin、Vimentin、snail mRNA表達水平變化。用10ng/mlTGF-β1分別刺激轉(zhuǎn)染前后細胞，用Western blot檢測刺激前后E-Cadherin、Vimentin蛋白水平變化，用Real time PCR檢測刺激前后E-Cadherin、Vimentin、snail mRNA表達水平變化。用免疫熒光法觀察

3、TGF-β1刺激及HAS-2沉默對E-Cadherin、Vimentin表達變化的影響。
　　結(jié)果：
　　1、轉(zhuǎn)染HAS-2 siRNA24小時后HAS-2 mRNA表達抑制率為(54.6±5.84)％;HAS-2蛋白在轉(zhuǎn)染48小時后表達抑制率為（40.5±5.32）％。
　　2、HAS-2 siRNA轉(zhuǎn)染48小時后E-Cadherin蛋白表達較陰性對照組上調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Vimentin蛋白及

4、Slug蛋白表達較陰性對照組下調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3、用10ng/mlTGF-β1刺激后，未轉(zhuǎn)染HAS-2siRNA組細胞48小時后E-Cadherin蛋白水平下調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Vimentin蛋白表達明顯上調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);已轉(zhuǎn)染48小時組細胞E-Cadherin蛋白表達水平明顯高于未轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);未轉(zhuǎn)染組細胞Vimentin蛋

5、白表達水平較刺激前明顯上調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組細胞Vimentin蛋白表達水平較未轉(zhuǎn)染組明顯下調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4、E-Cadherin mRNA在HAS-2siRNA轉(zhuǎn)染組的表達量上調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Vimentin mRNA及Snail mRNA在轉(zhuǎn)染組的表達量下調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　5、TGF-β1刺激未轉(zhuǎn)染HAS-2si

6、RNA組細胞，E-Cadherin mRNA水平較刺激前下調(diào)，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Vimentin及Snail mRNA表達較刺激前明顯上調(diào)，差別均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。TGF-β1刺激已轉(zhuǎn)染24小時的細胞，E-Cadherin mRNA表達水平較刺激前明顯下調(diào)，較刺激未轉(zhuǎn)染組細胞表達水平上調(diào)，差別均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Vimentin及Snail mRNA表達水平均較刺激前明顯上調(diào)，較刺激未轉(zhuǎn)染組

7、表達水平下調(diào)，差別均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　6、經(jīng)熒光顯微鏡觀察，TGF-β1刺激前轉(zhuǎn)染HAS-2siRNA組細胞E-cadherin表達較未轉(zhuǎn)染組細胞增多，Vimentin表達較未轉(zhuǎn)染組細胞減少;TGF-β1刺激后，未轉(zhuǎn)染組細胞E-cadherin表達較刺激前減少，Vimentin表達較刺激前明顯增多;轉(zhuǎn)染組細胞E-cadherin表達較未轉(zhuǎn)染組增多，Vimentin表達較未轉(zhuǎn)染組明顯減少。
　　結(jié)論：