抑癌基因AZGP1在食管鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義和功能的初步研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　 食管癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤之一,具有明顯的地區(qū)性分布差異,預后不佳。在我國食管癌死亡率高,并且病理類型主要以鱗狀細胞癌為主。我國高發(fā)區(qū)主要集中在太行山脈區(qū)域的河南邊境、山西和河北交界區(qū)。發(fā)病率由高到低向四周放射狀。近年來隨著外科、放療和化療等多學科統(tǒng)合治療食管癌取得不少進展,但其總體5年存活率仍較低。研究表明食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展與環(huán)境、生活習慣、營養(yǎng)狀況等密切相關(guān)。涉及一個或者多個基因多階段、多步驟

2、的過程,其中癌基因的啟動與抑癌基因的失活是非常重要的兩個方面,研究表明多個與腫瘤相關(guān)的基因也與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此,研究與食管癌相關(guān)基因及其作用,對食管癌的診斷、治療及指導預后具有重要意義。
　　 為了研究河南林州市地區(qū)食管鱗癌的癌變及轉(zhuǎn)移相關(guān)因子,通過在林州市人民醫(yī)院收集了包含腫瘤和癌旁正常組織的石蠟包埋標本299例,建立了一套包含臨床病理數(shù)據(jù)的食管鱗狀細胞癌的組織芯片。通過選取10對分別包含新鮮食管鱗癌和鄰近正常

3、食管上皮組織標本,抽提RNA,并分別等量混勻在一起。采用cDNA芯片檢測表達譜并進行比較,尋找到有表達差異的基因。
　　 通過基因的表達差異,發(fā)現(xiàn)腫瘤組織的AZGP1表達含量是其相應鄰近組織的-3.3倍。其在腫瘤組織中表達明顯下調(diào)。AZGP1是一種可溶性糖蛋白,有很多文獻報道在腫瘤惡病質(zhì)患者中AZGP1高表達,有些文獻報道其可以作為一種生物標記,同時有報導在胰腺癌中表達是下降的。但未見文獻報導AZGP1在食管鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中

4、的作用。
　　 材料和方法:
　　 1.55例食管癌手術(shù)切除標本取自河南省安陽腫瘤醫(yī)院,HE切片病理證實為鱗狀細胞癌。所有病例術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史。
　　 2.構(gòu)建食管癌組織芯片包括299例食管癌組織樣本,其中包括166名男性和133名女性患者；年齡從40歲至80歲,平均年齡為59.8歲。其中Ⅰ期病人12名,ⅡA期病人145名,ⅡB期病人30名,Ⅲ期病人98名,Ⅳ期病人9名,其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人135

5、名,原位癌5名。腫瘤的分級根據(jù)WHO分級標準,TNM分期參照UICC第6版TNM的分期標準(2002年)。
　　 3.通過RT-PCR方法檢測55例食管鱗狀細胞癌組織及其對應正常的癌旁組織中AZGP1mRNA的表達情況。免疫組化方法檢測食管癌組織芯片中AZGP1蛋白表達差異。
　　 4.將AZGP1基因克隆并連接到載體pcDNA3.1(+)并轉(zhuǎn)染到表達缺失的細胞株KYSE30。RT—PCR檢測轉(zhuǎn)染KYSE30細胞中AZG

6、P1mRNA表達情況；western-blot檢測轉(zhuǎn)染KYSE30細胞中AZGP1蛋白表達情況。
　　 5.細胞增殖實驗、平板克隆形成實驗、裸鼠荷瘤實驗研究AZGP1對食管癌細胞株的抑瘤能力研究。
　　 6.通過劃痕實驗了解AZGP1對于細胞遷移能力的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.AZGP1基因在55例食管鱗癌標本中mRNA表達情況,AZGP1在食管鱗癌組織中表達缺失率為69.09％(38／55).免疫

7、組化在蛋白質(zhì)水平上檢測臨床病理標本發(fā)現(xiàn)食管鱗癌中低表達或不表達率為70.4％(202／287),在所有正常鱗狀上皮組織中高表達。與腫瘤分化、腫瘤分期密切相關(guān)。
　　 2.AZGP1表達與臨床預后密切相關(guān)。
　　 3.細胞增殖實驗、平板克隆形成實驗、裸鼠體內(nèi)荷瘤實驗等均證明AZGP1能抑制ESCC細胞的成瘤能力。
　　 4.劃痕實驗證明AZGP1能夠抑制腫瘤細胞遷移和侵襲。
　　 5.免疫印記提示AZGP1