胰腺癌患者唾液中miR-21和miR-181a表達(dá)與中醫(yī)證型相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:
　　胰腺癌發(fā)病率和死亡率居全部惡性腫瘤的前10位，發(fā)病率與死亡率很接近，五年內(nèi)生存率極低，小于5％?？傮w來看，發(fā)達(dá)國(guó)家胰腺癌發(fā)病率高于發(fā)展中國(guó)家。上海市胰腺癌發(fā)病率最高，為3.7/10萬(wàn)。胰腺癌病情兇險(xiǎn)，死亡率接近于發(fā)病率，明確診斷后，患者的1年存活率為12％，5年存活率僅為1％～3％。目前，吉西他濱單藥是治療進(jìn)展期胰腺癌的標(biāo)準(zhǔn)方案，患者中位生存期為5-7個(gè)月，1年生存率約20％。為了改善療效，多種化療藥物和分子靶向藥

2、物被用來與吉西他濱聯(lián)合治療進(jìn)展期胰腺癌，但在Ⅲ期臨床試驗(yàn)中，只有吉西他濱聯(lián)合厄洛替尼和吉西他濱聯(lián)合卡培他濱較吉西他濱單藥顯示出微弱的優(yōu)勢(shì)。有研究以吉西他濱單藥作對(duì)照，聯(lián)合方案僅能提高患者無(wú)進(jìn)展生存期及總反應(yīng)率，并不能提高總生存期。
　　目前盡管近年來胰腺癌的治療取得一定進(jìn)展，但仍然面臨巨大挑戰(zhàn)，即不同種族人群或個(gè)體存在著顯著的治療敏感性和不良反應(yīng)差異。隨著基因組學(xué)研究技術(shù)的不斷發(fā)展，使得從個(gè)體基因組中分析和鑒別患者之間存在的疾病相

3、關(guān)的個(gè)體差異，并利用這些差異來合理地指導(dǎo)臨床治療成為現(xiàn)實(shí)?；蚪M學(xué)研究從整體水平反映了疾病過程中不同階段基因隨時(shí)空變化表達(dá)的動(dòng)態(tài)過程，與中醫(yī)學(xué)以證候概括發(fā)病過程的認(rèn)識(shí)方法有顯著相似之處，中醫(yī)學(xué)關(guān)于疾病“因人、因地、因時(shí)”的個(gè)體化辨證治療模式符合基因多態(tài)性的特點(diǎn)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為胰腺癌是一種全身性的疾病，而西醫(yī)學(xué)認(rèn)為胰腺癌的發(fā)病是多因素、多步驟、內(nèi)外因交互作用的過程，受多種基因、多個(gè)步驟的調(diào)控。近年來，隨著基因組學(xué)研究技術(shù)的不斷發(fā)展，有關(guān)中醫(yī)證

4、型與基因多態(tài)性的相關(guān)性研究成為中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究的熱點(diǎn)。
　　相關(guān)前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示證型對(duì)胰腺腫瘤生長(zhǎng)存在一定的影響，由此我們推斷證型的出現(xiàn)可能是不同機(jī)體微環(huán)境對(duì)腫瘤所作出一定的反應(yīng)，進(jìn)而我們通過研究腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、趨化因子等與腫瘤微環(huán)境相關(guān)因素，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)中醫(yī)證型與腫瘤微環(huán)境存在一定的聯(lián)系;通過臨床資料回顧性分析中醫(yī)證型與病人預(yù)后相關(guān)性，我們可以看出不同證型患者在藥物有效期、總體生存期上存在一定的差異，濕熱

5、證型病人具有生存優(yōu)勢(shì)、預(yù)后良好。
　　microRNA是一類長(zhǎng)度約為21～13個(gè)核苷酸大小的非編碼單鏈小RNA分子，越來越多的研究證明miRNA在細(xì)胞增殖、分化凋亡、壓力抵抗等多種生理病理過程中有重要作用。已有多項(xiàng)研究證實(shí)miRNA在腫瘤中發(fā)揮著類似于癌基因與抑癌基因的作用，其通過影響重要的腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)，從而對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及惡性程度等性狀進(jìn)行調(diào)控。胰腺癌發(fā)生表現(xiàn)于外是不同的臨床癥狀、體征，而在體內(nèi)則反映為不同生理病理

6、改變及多種相關(guān)基因的變異。臨床證候相同的患者可能存在較為一致的病理改變及相同的基因變異。因此，中醫(yī)證型可能與miRNA存在一定的關(guān)聯(lián)，探求中醫(yī)證型與miRNA之間的相關(guān)性，對(duì)中醫(yī)理論本質(zhì)的研究具有一定的意義。
　　研究目的:
　　1.回顧性分析胰腺癌患者化療療效、總體生存期與中醫(yī)證型的相關(guān)性;
　　2.探討胰腺癌患者唾液中miRNA的表達(dá)水平與中醫(yī)證型的相關(guān)性。
　　研究方法:
　　1.回顧性分析復(fù)旦大學(xué)附

7、屬腫瘤醫(yī)院2007年-2012年間的確診為胰腺癌病人的臨床資料195例，所有患者未經(jīng)手術(shù)治療且至少接受2個(gè)周期的吉西他濱化療，通過證型量表采集病人證型相關(guān)信息。使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析胰腺癌病人的無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)、總體生存期(OS)與中醫(yī)證型的相關(guān)性;
　　2.收集胰腺癌患者的唾液標(biāo)本，通過量表確定證型后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)胰腺癌患者唾液中miR-21、miR-181a、miR-222、miR-210的相對(duì)表達(dá)

8、量，以miR-16為內(nèi)參，采用2-△△CT分析方法對(duì)四種與胰腺癌相關(guān)miRNA的表達(dá)量進(jìn)行相對(duì)定量，以探索胰腺癌中醫(yī)證型與miRNA差異表達(dá)之間的相關(guān)性。
　　研究結(jié)果:
　　1.符合入組條件的病人資料195例，總體生存期(OS)在四組間具有一定的差異(P=0.003)，而無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)在組間則無(wú)明顯差異(P=0.063);濕熱組病人的總體生存期分別為201天，95％可信區(qū)間為171-231天，由此可推斷濕熱組在病人

9、預(yù)后生存相對(duì)其他三組具有一定的優(yōu)勢(shì)。
　　2.miR-21表達(dá)水平在四組組間存在差異(F=19.911，P=0.003)，濕熱組miR-21表達(dá)水平低于脾虛組(P=0.001)和無(wú)證組(P=0.000); miR181a表達(dá)水平在四組組間存在差異(F=20.103，P=0.024)，在濕熱組中表達(dá)水平低于脾虛組(P=0.036)和無(wú)證組(P=0.011)。而miR-222、miR-210在四組樣本中均未擴(kuò)增出。
　　研究結(jié)論