PI3K-Akt信號通路介導(dǎo)HER2與FASH相互作用調(diào)控大腸癌惡性表型及其分子機制的研究.pdf

1、[背景與目的]
　　脂肪酸合酶(fattyacidsynthase，F(xiàn)ASN)介導(dǎo)的脂肪酸從頭合成在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用，有研究表明HER2活化能夠?qū)е翭ASN的過表達并且誘導(dǎo)多種腫瘤細胞的惡性表型。此外，有報道PI3K/Akt信號通路參與多種腫瘤細胞的物質(zhì)代謝，并且對其惡性表型具有重要的調(diào)控作用。然而，HER2以及FASN是否通過PI3K/Akt信號通路調(diào)控大腸癌的惡性表型尚未見報道，其分子機制值得探究。本研究

2、旨在探討“HER2-PI3K/Akt-FASN軸”調(diào)控大腸癌惡性表型的分子機制，以期為深入了解大腸癌的發(fā)病機理以及尋找新的分子診斷標記物和靶向治療靶點提供實驗理論依據(jù)。
　　[方法]
　　1.RT-qPCR檢測人大腸癌細胞株Caco-2、HT-29、LoVo、LS174T的HER2、FASNmRNA表達；構(gòu)建陰性對照干擾質(zhì)粒，測序鑒定后瞬時轉(zhuǎn)染4株細胞檢測細胞的轉(zhuǎn)染效率。篩選HER2、FASNmRNA同時高表達，并且具有高轉(zhuǎn)

3、染效率的大腸癌細胞作為靶細胞。
　　2.構(gòu)建4個HER2干擾質(zhì)粒，測序鑒定后瞬時轉(zhuǎn)染靶細胞，RT-qPCR檢測各轉(zhuǎn)染細胞的HER2mRNA表達，篩選干擾效果最佳的HER2干擾質(zhì)粒；將干擾效果最佳的HER2干擾質(zhì)粒以及陰性對照干擾質(zhì)粒分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶細胞，RT-qPCR、WesternBlot檢測靶細胞的HER2、FASN表達，流式細胞儀檢測靶細胞的凋亡，MTT實驗以及平板克隆形成實驗觀察靶細胞的增殖能力，Transwell小室實驗檢

4、測靶細胞的遷移能力。
　　3.構(gòu)建4個FASN干擾質(zhì)粒，測序鑒定后瞬時轉(zhuǎn)染靶細胞，RT-qPCR檢測各轉(zhuǎn)染細胞的FASNmRNA表達，篩選干擾效果最佳的FASN干擾質(zhì)粒；將干擾效果最佳的FASN干擾質(zhì)粒以及陰性對照干擾質(zhì)粒分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶細胞，RT-qPCR、WesternBlot檢測靶細胞的FASN、HER2表達，流式細胞儀檢測靶細胞的凋亡，MTT實驗以及平板克隆形成實驗觀察靶細胞的增殖能力，Transwell小室實驗檢測靶細胞的

5、遷移能力。
　　4.將干擾效果最佳的HER2干擾質(zhì)粒、干擾效果最佳的FASN干擾質(zhì)粒以及陰性對照干擾質(zhì)粒分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶細胞，RT-qPCR、WesternBlot檢測靶細胞的PI3K、Akt、Phospho-Akt蛋白表達、細胞增殖能力、克隆形成率(2.05％±0.01)、遷移細胞數(shù)(182±14.53)、S期細胞百分數(shù)(7.21%±0.01)均明顯低于空白對照組以及溶劑對照組(P<0.01)；G1期細胞百分數(shù)(87.76%±0.

6、01)明顯高于空白對照組以及溶劑對照組(P<0.01)。
　　[結(jié)論]
　　1.HER2-RNAi能夠有效抑Caco-2細胞的HER2表達，進而下調(diào)Caco-2細胞的FASN表達、誘導(dǎo)Caco-2細胞的早期凋亡、抑制Caco-2細胞的增殖以及遷移能力。
　　2.FASN-RNAi能夠有效抑制Caco-2細胞的FASN表達，進而下調(diào)Caco-2細胞的HER2表達、誘導(dǎo)Caco-2細胞的早期凋亡、抑制Caco-2細胞的增殖

7、以及遷移能力。
　　3.HER2-RNAi、FASN-RNAi以及PI3K特異性抑制劑ZSTK474均能夠不同程度地抑制Caco-2細胞的PI3K/Akt信號通路活性；抑制PI3K/Akt信號通路的活性能夠明顯下調(diào)Caco-2細胞的HER2以及FASN表達、誘導(dǎo)Caco-2細胞的G1期細胞周期阻滯、抑制Caco-2細胞的增殖以及遷移能力。
　　提示PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)的HER2與FASN相互作用能夠有效調(diào)控大腸癌細胞