犬瘟熱病毒基因疫苗對小鼠的免疫及病毒單克隆抗體的研制.pdf

1、犬瘟熱(canine Distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(CDV)引起的一種高度接觸性傳染性疾病。目前對預防該病依賴弱毒疫苗的使用。但是現(xiàn)有弱毒疫苗的保護率不盡如人意。DNA疫苗等新型疫苗是發(fā)展的趨勢。 CDV是負鏈單股不分節(jié)段的RNA病毒。附著或血凝蛋白(H)其表面蛋白之 一，是病毒的保護性抗原，能夠激發(fā)針對CDV的保護性免疫。 為了探討利用基因疫苗進行CD預防的可能性，本實驗用已構(gòu)建好的犬瘟熱NJ-15

2、株H基因的真核表達質(zhì)粒肌肉注射免疫小鼠，用市售的弱毒疫苗免疫作陽性對照，以pcDNA3.1／zeo(+)原質(zhì)粒為陰性對照。每個免疫組12只清潔級昆明小鼠。免疫兩次，中間間隔2 week。質(zhì)粒免疫鼠抗體水平的ELISA效價峰值達到2<'-11>，并且持續(xù)了長達24 d，弱毒苗對照組抗體峰值達到2<'-14>，但達到峰值后迅速下降。IgG亞類檢測中質(zhì)粒免疫組IgG2α／IgG1達1.9／1，呈現(xiàn)明顯的Th1型免疫偏向。而弱毒免疫組IgG2α

3、與IgG1效價沒有明顯差異。中和試驗中質(zhì)粒免疫組的血清能夠有效阻止病毒在Vero細胞上產(chǎn)生病變，中和效價達1／16，略低于弱毒免疫組血清的1／64。淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗中質(zhì)粒免疫組刺激指數(shù)為9.9，免疫鼠的淋巴細胞具有較高的刺激轉(zhuǎn)化活性，弱毒免疫組刺激指數(shù)為15.1。以上結(jié)果說明此真核表達質(zhì)粒能夠有效地激發(fā)小鼠的體液免疫和細胞免疫，可以作為犬瘟熱防疫的一個候選方法。 CD目前的特異性診斷主要為PCR和熒光抗體。這種方法對儀器有著較高

4、的要求，不易于在臨床上推廣。利用單克隆抗體建立檢測方法簡便易行。本實驗利用已證明能激發(fā)小鼠產(chǎn)生針對CDV特異性免疫的真核表達質(zhì)粒免疫BLB／c小鼠制作單克隆抗體。利用全病毒包被ELISA板用間接ELISA法篩選抗體陽性克隆，用有限稀釋法進行亞克隆。篩出一株單抗株，雙夾心ELISA法證明其與保存的四株犬瘟熱病毒株都可以反應，而與對犬致病的其他主要四種病毒包括犬細小病毒(CPV)GN株、犬腺病毒(CAV)Manhattan LPV3株、犬副