Irx5a對于斑馬魚早期造血發(fā)育轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的影響.pdf

1、目的：為了解Irx5a基因?qū)υ缙谠煅l(fā)育的影響，檢測Irx5a對野生型斑馬魚基因表達量的變化；通過過表達Irx5a基因?qū)υ煅l(fā)育表達相關(guān)的造血轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的表達情況影響。
　　方法:構(gòu)建Irx5a-EGFP-pCS2+重組質(zhì)粒,驗證其正確性后，制備Irx5a-EGFP正義mRNA探針,通過顯微注射技術(shù)導(dǎo)入野生型斑馬魚（Tuebingen）中，觀察其在野生型斑馬魚胚胎中的表達情況。另外，以導(dǎo)入Irx5a-EGFP mRNA探針為實驗

2、組、EGFP mRNA探針為實驗對照組、野生型斑馬魚為空白對照組，應(yīng)用實時熒光定量PCR反應(yīng)檢測造血轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子如 scl、lmo2、c-myb、runx-1、gata-1、pu.1在實驗對照組及實驗組及空白對照組中的表達水平。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建Irx5a-EGFP-pCS2+重組質(zhì)粒；通過顯微注射Irx5a-EGFP mRNA發(fā)現(xiàn)，在斑馬魚胚胎3hpf開始出現(xiàn)綠色熒光，在12hpf-18hpf時熒光表達量最強，其后熒光表達也逐

3、漸減弱，至30hpf時熒光幾乎消失，僅在斑馬魚的眼睛有極少量的表達；Irx5a-EGFP mRNA作為實驗組，EGFP mRNA作為實驗對照組，野生型斑馬魚作為空白對照組，三組相比較基因表達量相對定量中可知：lmo2、scl、runx-1、pu.1實驗組表達量較另兩組表達量低，三組均隨著時相的增加基因表達量也增加，在12hpf中的表達量最高，以后逐漸減弱；但是c-myb、gata-1、中在18hpf中的表達量最高，以后逐漸減弱。