補腎疏肝方對神經(jīng)性厭食應激模型大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的調控機制研究.pdf

1、目的：探討神經(jīng)性厭食(anorexia nervosa,AN)應激模型的建模方法，確立本課題中AN應激模型的建立方法。研究補腎疏肝方對AN應激模型大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸(hypothalamus-pituitary-ovarian axis，HPOA)的調控機制。
　　 方法：(1)查閱AN及其動物模型的相關文獻，總結出AN動物模型的經(jīng)典造模方法。根據(jù)查閱文獻結果，選用AN的大鼠應激模型，此模型符合我們的研究內容和實驗條件。(

2、2)實驗探索AN大鼠應激模型的造模方法，在原模型建立方法上略加改進，經(jīng)陰道脫落細胞涂片證實，造模后大鼠動情周期紊亂，尤其表現(xiàn)為動情間期延長，這符合AN的閉經(jīng)表現(xiàn)，此模型符合我們的研究內容。由此確立本課題中AN應激模型的建立方法。(3)動物實驗：購進Wistar雌性大鼠50只，體重160g～180g，每日08：00行陰道脫落細胞涂片并觀察大鼠動情周期變化，選擇有連續(xù)兩個以上正常周期的大鼠用于實驗，其余則被淘汰。將入選大鼠按照隨機數(shù)字表法隨

3、機分為正常組、模型組、安慰劑組和補腎疏肝方組(以下簡稱中藥組)，每組10只。從實驗造模第一天開始，正常組用生理鹽水灌胃，模型組按照隔離、限食、束縛的步驟建立AN應激模型，安慰劑組在造模的同時用生理鹽水灌胃，中藥組在造模的同時用補腎疏肝方水煎濃縮劑灌胃。每日08：00行陰道脫落細胞涂片，觀察記錄動情周期以確定大鼠動情周期的變化。(4)灌胃約35天、大鼠處于動情間期時稱重，斷頭處死大鼠，收集血清和下丘腦、垂體、子宮、卵巢、腎上腺等組織標本，

4、計算下丘腦系數(shù)、卵巢系數(shù)、腎上腺系數(shù)等數(shù)值，用放射免疫方法檢測血清雌二醇(estradiol，E2)，垂體卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)、黃體生成素(luteotrophic hormone，LH)和下丘腦β-內啡肽(β-endorphin,β-EP)，用酶聯(lián)免疫法測定血清皮質酮(corticosterone，CORT)、下丘腦多巴胺(dopamine，DA)、去甲腎上腺素(noradre

5、naline，NE)和5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)。
　　 結果：(1)本課題參照文獻結合實驗探索，按照隔離、限食、束縛的步驟建立了AN大鼠應激模型，通過觀察陰道脫落細胞涂片，發(fā)現(xiàn)大鼠動情周期紊亂，尤其表現(xiàn)為動情間期延長，甚至持續(xù)處于動情間期，這符合AN的閉經(jīng)表現(xiàn)，此模型符合本課題的研究目的。(2)體重：模型組、安慰劑組和中藥組體重顯著低于正常組(P＜0.01)；中藥組體重顯著高于安慰劑組(P＜

6、0.01)，高于模型組，但無統(tǒng)計學差異。(3)大鼠動情周期變化情況：統(tǒng)計出造模第20天、25天和35天的周期紊亂率，20天時模型組、安慰劑組和中藥組的紊亂率分別是：70.0％、77.8％和33.3％，25天時分別為90.0％、88.9％和33.3％，35天時分別是：100.0％、88.9％和77.8％，可見中藥組大鼠動情周期紊亂率明顯低于模型組和安慰劑組。(4)大鼠臟器系數(shù)：下丘腦系數(shù)、垂體系數(shù)、卵巢系數(shù)，各組之間無統(tǒng)計學差異；子宮系數(shù)

7、，安慰劑組明顯低于正常組(P＜0.05)，模型組低于正常組，中藥組高于模型組和安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異；腎上腺系數(shù)，安慰劑組比正常組、模型組顯著升高(P＜0.01)，中藥組低于安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異。(5)垂體FSH水平：模型組明顯低于正常組(P＜0.05)，安慰劑組顯著低于正常組(P＜0.01)，中藥組高于模型組和安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異；垂體LH水平：模型組顯著低于正常組(P＜0.01)，中藥組明顯高于模型組(P＜0.05)，高于

8、安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異。(6)血清E2水平：模型組和安慰劑組明顯低于正常組(P＜0.05)，中藥組明顯高于模型組(P＜0.05)，高于安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異。血清CORT水平：模型組明顯高于正常組(P＜0.05)，安慰劑組顯著高于正常組(P＜0.01)。中藥組明顯低于模型組(P＜0.05)，顯著低于安慰劑組(P＜0.01)。(7)下丘腦β-EP水平：模型組和安慰劑組顯著高于正常組(P＜0.01)，中藥組明顯低于安慰劑組(P＜0.05

9、)，低于模型組，但無統(tǒng)計學差異。(8)下丘腦DA水平：安慰劑組明顯高于正常組(P＜0.05)，模型組高于正常組，中藥組低于安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異。下丘腦NE水平：正常組明顯高于模型組和安慰劑組(P＜0.05)，中藥組高于模型組和安慰劑組，但無統(tǒng)計學差異。下丘腦5-HT水平：各組之間無明顯差異。
　　 結論：(1)按照隔離、限食、束縛的步驟建立的大鼠模型，是AN的應激模型，該模型符合本課題的研究內容。(2)補腎疏肝方可以增加AN