宮頸癌及癌前病變組織中HPV16 E7與HLA-Ⅰ類分子表達相關(guān)性研究.pdf

1、目的 研究宮頸癌及癌前病變組織中人乳頭瘤病毒16型(HPVl6)E7基因含量、人白細胞抗原I類分子(HLA-I)表達與宮頸疾病惡性進展三者間的相關(guān)關(guān)系，并探討HPVl6E7可能的致癌機制。 方法 1．實時熒光定量測定HPVl6 E7基因：提取467例山東婦女宮頸各級病變組織DNA，以人乳頭瘤病毒16型(HPV16)E7基因作為擴增的靶基因，同時以人β-肌動蛋白基因片段作為內(nèi)參照，借助于設(shè)計的目的基因引物及特異性熒

2、光探針，建立各自的標準曲線，用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RFQ-PCR)同時擴增兩個基因片段。為消除標本間在DNA提取和產(chǎn)量方面存在的差異，以E7和β-肌動蛋白的含量比值(CE/Cβ，即單位細胞內(nèi)HPVl6E7含量)作為評價組織所含HPVl6E7 DNA載量的指標。 2．免疫組化S-P染色：石蠟切片經(jīng)二甲苯常規(guī)脫蠟，梯度酒精水化后入枸櫞酸鹽修復(fù)液，98℃熱修復(fù)15 min；冰凍切片室溫干燥后入冰丙酮固定10min。經(jīng)上述預(yù)處理后

3、，所有切片按試劑盒說明進行免疫組化染色以測定HLA-I類分子表達情況。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照；用以前實驗中宮頸炎陽性標本作陽性對照，正常淋巴細胞作內(nèi)參照。 結(jié)果 1．在β-肌動蛋白陽性的宮頸各級病變組織中，HPVl6E7含量(中位數(shù))在宮頸鱗癌組最高(2453拷貝/細胞)，其次分別為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組(44.96拷貝/細胞)、宮頸腺癌組(18.6拷貝/細胞)及宮頸炎組(0拷貝/細胞)；其中宮頸癌組與宮頸

4、炎組、宮頸癌組與CIN組、CIN組與宮頸炎組間HPV16E7含量差異有顯著性意義，P值均<0.001。HPV16E7含量隨病情加重(從宮頸炎到宮頸癌)呈上升趨勢，二者呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.848(P<0.001)。 2.HPV16E7陽性率在宮頸鱗癌組、宮頸腺癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組和宮頸炎組分別為98.3﹪、22.6﹪、78.8﹪、10.5﹪。病毒陽性率在鱗癌組與宮頸炎組、CIN組與宮頸炎組、腺癌組與宮頸炎組、

5、鱗癌組與宮頸腺癌組、鱗癌組與CIN組、CIN組與腺癌組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。 3.HLA-I類分子表達率隨宮頸病變程度進行性下降，相關(guān)系數(shù)為0.434(P<0.001)。HLA-I類分子陽性率在鱗癌組與宮頸炎組、CIN組與宮頸炎組、腺癌組與宮頸炎組、腺癌組與鱗癌組、鱗癌組與CIN組、腺癌組與CIN組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。 4.宮頸癌及癌前病變組織中HPV16病毒感染與HLA-I類抗原缺失高度相