脂肪間充質干細胞向心肌細胞分化過程中MocrpRNAi活性變化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 1.探索SD大鼠脂肪間充質干細胞(ADMSCs)的分離、培養(yǎng)方法；
　　 2.證明ADMSCs在5-氮雜胞苷(5-Aza)誘導下可分化為心肌細胞；
　　 3.探討ADMSCs細胞在向心肌細胞分化過程中miRNA的變化譜。
　　 方法：
　　 1.SD大鼠ADMscs的分離、培養(yǎng)、鑒定：無菌條件下取SD大鼠腹股溝皮下脂肪組織，采用胰酶加Ⅰ型膠原酶消化法及貼壁法進行分離培養(yǎng)及形態(tài)學觀察；

2、取第3代細胞進行表面抗原的免疫細胞化學鑒定；
　　 2.ADMSCs的體外誘導及鑒定：對第3代細胞行5-Aza誘導，觀察細胞形態(tài)變化，進行α-actin及cTnT免疫細胞化學鑒定。
　　 3.測定培養(yǎng)ADMSCs向心肌細胞分化過程中miRNA的變化譜：細胞分為三組，第一組為第三代ADMSCs，第二組為同期培養(yǎng)未經誘導的ADMSCs，第三組為經5-Aza誘導后培養(yǎng)四周的細胞。應用miRNA生物傳感器陣列(miRNA A-S

3、ensor Array)方法分別檢測以上三組細胞的miRNA譜，比較之間的差異。
　　 結果：
　　 1.脂肪組織中含有大量長梭形細胞，成螺旋形生長，免疫化學鑒定顯示與空白對照相比較細胞表面分子抗原CD13、CD44、CD105呈陽性反應，CD34、CD45、HLA-DR和VⅢ因子均為陰性反應。
　　 2.10umol/L的5-Aza誘導24小時后更換含10％胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，多數(shù)細胞為長梭形，部

4、分細胞形態(tài)變?yōu)椴灰?guī)則星狀或桿狀，細胞體積及胞核變大，部分細胞聚集成團。與空白對照比較28d后多數(shù)細胞免疫細胞化學染色顯示α-actin、cTnT呈陽性反應。
　　 3.應用miRNA生物傳感器陣列(miRNA A-Sensor Array)方法分別檢測三組細胞123種miRNA活性，第三代ADMSCs中miRNA活性值RIF不小于5的共有35種。發(fā)現(xiàn)誘導后細胞的所有miRNA活性均有所上升?；钚陨仙顬槊黠@的15種miRNA順序

5、為：1et-7a，1et-7b，1et-7e，1et-7f，1et-7g，miR-125a-5p，miR-142-5p，miR-143，miR-145，miR-21，miR-222，miR-34c-5p，miR-92a。
　　 結論：
　　 1.出生三天的SD大鼠脂肪組織中含有具有多向分化潛能的間充質干細胞。
　　 2.10umol/L濃度的5-Aza可誘導脂肪干細胞分化為心肌樣細胞。
　　 3.miRN