肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP-2、MMP-14、鈣粘蛋白與胃癌生物學行為關系的研究.pdf

1、腫瘤侵襲轉移是惡性腫瘤最重要也是最本質的生物學特征，是引起惡性腫瘤患者預后不良和死亡的主要原因。目前，胃癌仍是我國乃至全世界發(fā)病率和死亡率很高的惡性腫瘤。胃癌早期沒有特異性的癥狀，大多數(shù)患者就診時已到晚期，而晚期胃癌預后很差，患者常常因為廣泛的侵襲轉移而死亡。因此，對胃癌侵襲轉移相關免疫分子和基因的研究，可以為胃癌侵襲轉移的早期診斷和靶向治療提供幫助和依據(jù)。胃癌的侵襲轉移在本質上是一個多步驟的復雜事件，包含下列幾個主要過程(1)腫瘤細胞

2、與正常細胞、細胞外基質的粘附改變(2)細胞外基質降解增加(3)腫瘤細胞的遷移(4)新生血管形成(5)癌細胞逃避宿主免疫監(jiān)視得以生存增殖。但目前胃癌侵襲轉移分子機制尚未明確，尋找及研究胃癌侵襲轉移相關基因及其產(chǎn)物的表達變化和功能，對早期診斷、指導治療、評價預后具有重要的臨床意義。本文就肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白在胃癌組織及胃周正常粘膜的表達進行了研究，并就肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋

3、白與胃癌的生物學行為進行了統(tǒng)計學分析，以期了解肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白作為胃癌復發(fā)或轉移的臨床篩選指標的可能性。 實驗方法： 1、收集2007年中國醫(yī)科大學附屬一院胃癌手術標本及病理石蠟塊。67例胃癌組織及癌旁正常胃組織取自中國醫(yī)科大學附屬一院腫瘤科2007年4月—2007年8月間手術切除的新鮮標本。每例分別取胃癌組織及癌旁正常胃組織(距癌緣5cm以上)各一塊，—80℃冰箱保存。

4、2、免疫組織化學方法檢測肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白在胃癌及胃周正常粘膜的表達。 3、Western blot方法檢測肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白在胃癌及胃周正常粘膜的表達。 4、RT-PCR方法檢測肝素酶、基質金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白基因在胃癌及胃周正常粘膜的表達。 5、統(tǒng)計學分析應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，采用卡方檢驗、t檢驗和s

5、pearman等級相關分析方法，P<0.05定為統(tǒng)計學上有顯著性差異。 實驗結果： 1、肝素酶在胃癌組織中的表達增高。免疫組化結果顯示，肝素酶蛋白在胃癌組織中的表達率為76.1％，在正常胃黏膜也有20.9％的表達率，二者有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。Western blot實驗顯示，肝素酶蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是77.6％及23.9％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.915±0.12

6、4和0.665±0，095(P<0.05)。RT-PCR結果顯示，肝素酶mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是74.6％及31.3％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.399±0.054和0.141±0.035(P<0.05)。肝素酶蛋白及mRNA的表達與胃癌的大體類型，浸潤深度，細胞分化程度，組織學生長方式，淋巴轉移及TNM分期呈正相關，而與腫瘤大小無關。 2、免疫組化結果顯示，基質金屬蛋白酶MMP—

7、2蛋白在正常胃組織不表達，而在胃癌組織中顯著高表達，表達率為85.1％，與正常胃組織比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。Western blot實驗顯示，基質金屬蛋白酶MMP—2蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是88.1％及16，4％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.936±0.143和0.632±0.115(P<0.05)。RT-PCR結果顯示，基質金屬蛋白酶MMP—2mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表

8、達率分別是83.6％及56.7％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.573±0.084和0.364±0.065(P<0.05)?；|金屬蛋白酶MMP—2表達與胃癌的浸潤深度，細胞分化程度，淋巴轉移及TNM分期呈正相關，而與腫瘤大小、大體類型、組織學生長方式無關。 3、免疫組化結果顯示，基質金屬蛋白酶MMP—14在正常胃組織不表達，而在胃癌組織中顯著高表達，表達率為91.0％，與正常胃組織比較有統(tǒng)計學差異(P<0.0

9、5)。Western blot實驗顯示，基質金屬蛋白酶MMP—14蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是94％及19.4％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.908±0.138和0.563±0.102(P<0.05)。RT-PCR結果顯示，基質金屬蛋白酶MMP—14mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是77.6％及43.3％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.887±0.104和0.553

10、±0，085(P<0.05)?；|金屬蛋白酶MMP—14表達與胃癌的浸潤深度，細胞分化程度，淋巴轉移及TNM分期呈正相關，而與腫瘤大小、大體類型、組織學生長方式無關。 4、免疫組化結果顯示，鈣粘蛋白在胃癌組織中表達降低或缺失。在67例正常胃粘膜上皮表達陽性率為94％；而在胃癌組織中瘤細胞染色與正常上皮細胞相似，表達降低，有時可見胞漿染色，陽性表達率為55.2％，其差別有顯著性意義(P<0.05)。Western blot實驗顯示

11、，鈣粘蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是50.7％及97％(P<0.05)。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.557±0，113和0.924±0.141(P<0.05)。RT-PCR結果顯示，鈣粘蛋白mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達率分別是86.6％及98.5％(P<0.05)specif。在兩者中的表達平均指數(shù)分別為0.541±0，084和0.722±0.115(P<0.05)。胃癌鈣粘蛋白的表達缺失與胃癌的浸潤深

12、度，細胞分化程度，淋巴轉移及TNM分期呈正相關，而與腫瘤大小、大體類型、組織學生長方式無關。 5、MMP—2、MMP—14在胃癌組織中高表達有相關性，肝素酶、MMP—2、鈣粘蛋白的表達無相關性。 結論： 1、肝素酶在胃癌組織中的表達增高，與胃癌的生物學行為及預后判斷有關。 2、MMP—2在胃癌組織中高表達，與胃癌的生物學行為及預后判斷有關。 3、MMP—14在胃癌組織中高表達，與胃癌的生物學行為及