肝臟疾病相關遺傳因素及其致病機制的研究.pdf

1、目的：從分子遺傳學水平研究我國常見遺傳性肝臟疾病、不明原因肝病及特殊表型肝病的發(fā)病機制，尋找新突變，解釋突變對蛋白功能的影響，闡明肝臟疾病的遺傳致病機制，為臨床診斷及治療提供依據(jù)。主要分三部分進行研究，第一部分關于我國肝豆狀核變性臨床及分子遺傳特征；第二部分關于糖原累積癥的分子遺傳致病機制；第三部分主要為其他不明原因肝病及特殊表型肝病的初步探討。
　　 方法：在第一部分的研究中，一共納入了62例肝豆狀核變性(WD)患者(58例先

2、癥者)，其中男性37名(n=37)，女性25名(n=25)，發(fā)病年齡在2.6歲～61歲，80.6％的患者為兒童(<18歲，n=50)。分析患者臨床特征，抽提基因組DNA，應用PCR方法擴增ATP7B基因啟動子區(qū)、外顯子區(qū)及附近50個堿基左右的序列，測序分析基因突變；分析分子遺傳缺陷與臨床表型的關系。在第二部分的研究中，一共納入了2個糖原累積癥(GSD)家系共3個患者?；驕y序發(fā)現(xiàn)致病突變；分離外周血PBMC，EBV誘導建立永生化細胞系；

3、應用人類全基因組表達譜芯片研究患者基因表達的改變；構建野生及突變克隆研究突變對蛋白功能及穩(wěn)定性的影響。第三部分主要收集臨床不明原因肝病或者是特殊臨床表型患者，EBV誘導建立永生化細胞系，基因測序或者高通量測序發(fā)現(xiàn)致病基因，探討復雜肝臟疾病的遺傳發(fā)病機制。
　　 結果：WD神經(jīng)型患者診斷時年齡及診斷延誤時間明顯大于WD肝病型患者(P<0.0001)；而且診斷時的年齡與24小時尿銅排泄量成正相關(r=0.58，P<0.001)。WD

4、患者基因檢測總共檢測到40種不同的變異，其中14種突變形式為國內外首次報道；而最常見的突變?yōu)閜.Arg778Leu(31.9％)及p.Pro992Leu(11.2％)。p.Arg778Leu純和突變及嚴重突變患者臨床多為肝病型(P=0.0286及P=0.0383)，且診斷時ALT水平明顯高于其他突變組(P=0.0361及P=0.0047)；另外嚴重突變血清銅藍蛋白水平明顯低于其他組(P=0.0065)。
　　 對2例GSD-Ⅲ患

5、者AGL基因測序，檢測到c.118C>T(p.Gln40X)及c.753_756Del CAGA(p.Asp251Glufsx29)復合雜合突變；對GSD-Ia患者G6PC基因測序，檢測到：c.1074A>C(p.Stop358Tyr-ext43)純和突變；其中c.753_756 Del CAGA(p.Asp251Glufsx29)及c.1074A>C(p.Stop358Tlyr-ext43)為國內外首次報道的新變異形式。兩例GSD-Ⅲ

6、患者AGL蛋白表達完全缺失，而患者父母AGL蛋白表達量亦有降低，介于患者與健康對照之間。3例GSD患者均顯示有空腹酯?；鈮A異常。GSD-Ⅲ患者全基因組表達譜分析顯示：PPAR信號通路、脂肪酸合成、脂肪酸合成及內臟脂肪沉積、代謝綜合癥及細胞因子與受體等信號通路是AGL基因缺陷最常受累的分子。GSD-Ⅲ患者PPARG、ACSL6、ACACB、MCAT、HSD11B1及CCL2等基因表達高于健康對照，分子網(wǎng)絡分析提示這些基因可能在GSD-Ⅲ

7、病人脂肪及脂肪酸代謝異常中起著重要的作用。
　　 紅細胞生成型原卟啉病患者經(jīng)測序及cDNA高分辨電泳發(fā)現(xiàn)并鑒定到3種FECH基因異常剪切體。4例血色病患者常見致病基因檢測，檢測到兩個雜合突變：HFE基因p.His63Asp雜合突變及TFR2基因p.Ala75Val雜合突變。目前已收集到多個特殊表型肝病患者家系，建立了永生化細胞系。
　　 結論：ATP7B基因檢測是WD青少年患者，特別是少于8歲的患者，最有價值的診斷檢測手

8、段，且ATP7B基因型至少部分決定著WD的臨床表現(xiàn)，對臨床診斷具有預測價值。點突變p.Arg778Leu和p.Pro992Leu可以作為我國WD基因診斷快速經(jīng)濟的篩查位點。GSD-Ⅲ及GSD-Ia患者可以出現(xiàn)血酯?；鈮A異常。AGL基因突變誘導PPAR信號通路、脂肪/脂肪酸合成及細胞因子與受體相關基因表達上調可能是GSD高脂血癥及脂肪肝的發(fā)病原因。對紅細胞生成型原卟啉病、血色病及部分特殊表型肝病患者進行了初步研究，為今后進一步研究打下了