全反式維甲酸作用于人肝癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、目的：研究全反式維甲酸對人肝癌細胞HepG2上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響,探討ATRA逆轉(zhuǎn)肝癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的可能機制。
　　方法：培養(yǎng)人肝癌細胞系HepG2細胞進行實驗,在不同濃度及不同時段分別用TGF-β、ATRA單獨和聯(lián)合處理細胞,采用MTT法測定各實驗組HepG2細胞的抑制率及半數(shù)抑制濃度,按5ng/ml加入TGF-β建立人肝癌細胞系HepG2細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型,然后用ATRA干預(yù)癌細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型24h、48h、72h后

2、,8μmTranswell法檢測肝癌細胞的遷移,采用免疫細胞化學(xué)方法觀察和比較陽性對照組,模型組,ATRA干預(yù)組E-鈣黏蛋白、波形蛋白、Smad2/3表達水平。
　　結(jié)果：
　　(1)不同濃度的TGF-β單獨作用24、48、72h,誘導(dǎo)HepG2細胞向間質(zhì)細胞形態(tài)轉(zhuǎn)化,對細胞的增殖無明顯影響;ATRA干預(yù)HepG2細胞48h,在0.1、1umol/L可部分抑制HepG2細胞的增殖,在100umol/L處ATRA作用48h時抑

3、制HepG2細胞的增殖作用最強,(P<0.01),可達97％,ATRA的IC50為12.43umol/L;1、5、10ng/mlTGF-β預(yù)處理HepG2細胞24h后,10umol/LATRA對其干預(yù)48小時,與對照組、模型組相比顯著抑制細胞生長(P<0.05),48h的抑制率達(45.86±0.87)%。
　　(2)TGF-β誘導(dǎo)HepG2細胞遷移,(P<0.05),其促進作用呈劑量依賴性。ATRA干預(yù)TGF-β預(yù)處理HepG2

4、細胞,與TGF-β組遷移細胞的數(shù)量明顯減少(P<0.05)。
　　(3)在免疫細胞化學(xué)的分析中,與陽性對照組的相比,E-cadherin在模型組陽性細胞數(shù)量顯著減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),在ATRA組及ATRA干預(yù)模型組增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,ATRA組和ATRA干預(yù)模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與ATRA組相比,ATRA干預(yù)模型組有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與陽性對照組相比

5、,Vimentin在模型組陽性細胞數(shù)量顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),ATRA組及ATRA干預(yù)模型組顯著減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,ATRA組及ATRA干預(yù)模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與ATRA干預(yù)模型組相比,Smad2/3在模型組陽性細胞數(shù)量顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),在ATRA組減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：全反式維甲酸上調(diào)E-鈣黏蛋白的表