細(xì)胞緊密連接蛋白基因claudin-11在膀胱癌組織中的表達(dá)變化及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景
　　 膀胱癌是常見的泌尿生殖系腫瘤，目前對(duì)于膀胱痛患者的診斷主要依據(jù)膀胱鏡檢和組織病理活檢，但是目前的病理學(xué)診斷存在缺陷，如對(duì)于原位癌的診斷，有可能導(dǎo)致對(duì)膀胱癌診斷的局限性，此外對(duì)膀胱癌的分級(jí)診斷方面，病理診斷也缺乏精確性，，因此延誤患者的治療時(shí)機(jī)，影響患者的預(yù)后及生活質(zhì)量。因此，尋找一種無創(chuàng)的，敏感性高的方法對(duì)膀胱癌進(jìn)行早期診斷及判斷預(yù)后有著深遠(yuǎn)的意義。claudins蛋白是上皮細(xì)胞不可或缺的膜內(nèi)在緊密連接蛋白，cl

2、audins的異常表達(dá)可引起上皮組織中緊密連接完整性的破壞，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附減弱，細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)因子及其他因子擴(kuò)散，從而引起細(xì)胞極性丟失、生長(zhǎng)失控，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。
　　 研究目的
　　 研究細(xì)胞緊密連接蛋白基因claudin-11在膀胱癌組織和癌旁組織的表達(dá)變化，并探討其在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制。
　　 研究方法
　　 采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timePCR)檢測(cè)cl

3、audin家族在32對(duì)膀胱尿路上皮癌組織及其配對(duì)的癌旁組織中的表達(dá)水平。對(duì)claudin-11啟動(dòng)子區(qū)域的CpG島序列進(jìn)行重亞硫酸鹽處理，然后針對(duì)處理過的序列設(shè)計(jì)三個(gè)甲基化的目的基因片段，選取10例全膀胱手術(shù)患者癌及癌旁標(biāo)本用亞硫酸氫鹽測(cè)序法(BPS)法檢測(cè)claudin-11在膀胱癌組織中的甲基化表達(dá)情況。用5-Aza-dc對(duì)膀胱癌細(xì)胞株進(jìn)行去甲基化處理，同時(shí)設(shè)計(jì)空白對(duì)照組，觀察細(xì)胞株隨著時(shí)間的推移，其去甲基化程度的變化。最后討論cl

4、audin-11基因在膀胱癌組織中的表達(dá)變化以及claudin-11啟動(dòng)子區(qū)域CpG島甲基與膀胱癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。
　　 結(jié)果
　　 對(duì)細(xì)胞緊密連接蛋白claudins基因在膀胱癌組織中的篩選結(jié)果顯示claudin-1，4，7在膀胱癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，claudin-11在膀胱癌中呈現(xiàn)低表達(dá)，比較claudin-11在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌和肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中癌及癌旁的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)claudin-11在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌

5、和肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中的表達(dá)無明顯差異。以claudin-11作進(jìn)一步研究，BPS法檢測(cè)結(jié)果顯示在所設(shè)計(jì)的claudin-11啟動(dòng)子區(qū)域CpG島甲基化的三個(gè)目的片段中，第一個(gè)片段(93.1％vs82.3％，P<0.001)與第三個(gè)片段(25.5％vs18.7％，P<0.001)中claudin-11在膀胱癌中的甲基化程度比癌旁高，第二個(gè)目的片段(11.5％vs13.9％P>0.05)中claudin-11在膀胱癌與癌旁中的甲基化程度統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、沒有顯著差異。去甲基化后的膀胱癌細(xì)胞株5637隨著時(shí)間的推移，claudin-11的表達(dá)越來越高。
　　 結(jié)論
　　 進(jìn)一步驗(yàn)證了claudin-1，4，7在膀胱癌組織中的表達(dá)情況，提示了claudin-11基因的失活與膀胱癌的發(fā)生相關(guān)，但是與膀胱癌的分級(jí)分期無明顯相關(guān)。Claudin-11啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)CpG島的甲基化可能是導(dǎo)致其在膀胱癌組織中失活的主要因素，并且claudin-11在膀胱癌中的失活可以增加膀胱癌細(xì)胞的侵