CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞移植對缺血性腦卒中大鼠腦白質的保護作用.pdf

1、目的：⑴構建腦缺血/再灌注大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞靜脈輸注移植治療模型，探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植對腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積和神經(jīng)功能的影響。⑵通過觀察腦缺血/再灌注大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植后腦白質組織學相關指標，研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞對缺血后腦白質損傷的作用。
　　 方法：①選用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重275g-300g。將動物隨機分為

2、：正常組(co)、假手術組(sham)和手術組。采用改良的Zealonga線栓法對手術組大鼠施行大腦中動脈阻塞缺血再灌注(MCAO/R)術。手術組分為以下三個亞組：調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植組(Treg組)，經(jīng)股靜脈輸注移植2×106個大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞，構建調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植治療模型；脾細胞輸注移植組(SP組)，經(jīng)股靜脈輸注移植同等數(shù)量的脾細胞；PBS輸注組(PBS組)經(jīng)股靜脈注入等體積的PBS緩沖液。分別在移植術后24h

3、和72h對大鼠神經(jīng)功能進行評定，術后72h斷頭取腦，采用TTC染色和圖像分析軟件計算梗死體積，并對手術組腦梗死體積和神經(jīng)功能學評分進行相關統(tǒng)計學分析。②選用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重275g-300g。將動物隨機分為：正常組(co)、假手術組(sham)和手術組。采用改良的Zealonga線栓法對手術組大鼠施行大腦中動脈阻塞缺血再灌注(MCAO/R)術。手術組分為以下三個亞組：調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植組(Tr

4、eg組)，經(jīng)股靜脈輸注移植2×106個大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞，構建調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植模型；脾細胞輸注移植組(SP組)，經(jīng)股靜脈輸注移植同等數(shù)量的脾細胞；而在PBS輸注組(PBS組)經(jīng)股靜脈注入等體積的PBS緩沖液。術后72小時斷頭取腦，制備腦組織石蠟切片，免疫熒光染色觀察缺血半球寡突膠質細胞(Oligedendrocytes，OLs)及髓鞘堿性蛋白(MBP)、神經(jīng)絲蛋白200(NF200)標記的軸突，并對OLs數(shù)量及MBP

5、、NF200熒光強度進行相關統(tǒng)計學分析。
　　 結果：⑴調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植組腦梗死體積及梗死半球體積占健側體積的比值較SP組和PBS組均顯著減小(p<0.01)；在術后24h、72h神經(jīng)功能評分實驗中，Treg組ZeaLonga評分均顯著低于SP組和PBS組(p<0.01)，24h、72h mNSS評分見Treg組較SP組和PBS組亦顯著降低(p<0.05)。⑵免疫熒光顯微鏡檢測腦缺血后腦白質相關指標顯示：手術組缺血半球梗死邊

6、緣區(qū)紋狀體部位MBP、NF200較正常組和假手術組同側半球相比，熒光強度顯著降低(p<0.05)，Treg組較SP組、PBS組上述指標熒光強度均顯著增強(p<0.05)。觀察各組缺血半球胼胝體部位OLs可見，手術組較對照組數(shù)量顯著減少(p<0.01)，Treg組較SP組、PBS組數(shù)量顯著增多(p<0.01)。
　　 結論：①采用股靜脈輸注移植方式可以成功構建出穩(wěn)定的大鼠腦缺血再灌注CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞輸注移植治療模型。