膽汁淤積性肝纖維化時的病理改變及FoxL1在肝組織中的表達和意義初探.pdf

1、肝纖維化是肝臟對各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應，表現(xiàn)為肝內膠原纖維異常增生，肝細胞變性壞死，肝組織結構和功能遭到破壞。臨床研究和動物實驗都已證明，肝纖維化是慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經途徑。因此探討肝纖維化時的病理改變對深入研究肝纖維化的形成機制具有重要意義。 用于肝纖維化研究的動物模型有：中毒性肝損傷模型、膽汁性肝損傷模型、免疫性肝損傷性肝纖維化模型等，而本研究則選用小鼠膽總管結扎致肝纖維化的動物模型。該模型因具有操作簡單、穩(wěn)

2、定可靠等特點，成為研究中非常常用的實驗模型。在小鼠體內行膽總管結扎術后，可引起膽汁肝內淤積。當肝細胞受到刺激后，趨化因子和細胞因子釋放、中性粒細胞等募集到肝臟，進而出現(xiàn)肝細胞凋亡、壞死、肝性炎癥，細胞增殖等一系列相關反應。 在本課題中，我們通過膽總管結扎手術成功建立并評價了小鼠膽汁淤積性肝纖維化模型，并以此為體內模型研究肝纖維化形成過程中的病理改變，本實驗選用與炎癥相關的KC-1、MIP-2、ICAM-1和MPO作為評價肝性炎癥

3、浸潤的指標，用與增殖相關的抗原PCNA、Ki-67和CK-19作為評價細胞增殖的指標，用TUNEL染色和病理切片作為評價凋亡和壞死的指標，研究膽汁淤積性肝纖維化形成中肝性炎癥、細胞增殖、凋亡和壞死情況。實驗研究結果顯示：膽總管結扎后，隨著趨化因子和細胞因子的升高，炎癥細胞浸潤，導致肝損傷。與假手術組相比，模型組肝性炎癥、細胞增殖、凋亡和壞死均顯著增加。提示肝纖維化的形成是多因素、多環(huán)節(jié)相互作用和調控的結果，但其確切機制尚未完全闡明。

4、 Fox(forkhead/winged helix transcription factor)基因家族是2000年才統(tǒng)一命名的功能多樣的“翼螺旋”轉錄因子，該家族成員具有一個高度保守的Forkhead結構域，具有DNA結合、轉錄活化和轉錄抑制等功能。已有研究結果表明肝星形細胞(hepatic stellate cell，HSC)激活是肝纖維化發(fā)生的關鍵環(huán)節(jié)，而TGF-β1/Smads信號通路是調控HSC活化的主要通路。FoxC1調

5、控的部分靶基因有Smad2、BMP-7、TGF-β1等，提示FoxC1參與了TGF-β1信號通路。FoxL1是表達于胃腸道間葉細胞的轉錄因子，其Forkhead區(qū)域與FoxC1在核苷酸水平的同源性高達83％，由此提示：FoxL1可能通過參與TGF-β1/Smads信號通路，在調控肝纖維化形成過程中發(fā)揮重要作用。 在課題中我們采用逆轉錄PCR技術、實時熒光定量PCR技術、免疫組織化學染色技術以及Western blotting技術