硼替佐米耐藥多發(fā)性骨髓瘤細胞基因表達譜分析.pdf

1、目的:應用基因芯片技術(shù)分析硼替佐米敏感多發(fā)性骨髓瘤細胞株KM3與耐藥多發(fā)性骨髓瘤細胞株KM3/BTZ基因表達的差異性，探討硼替佐米耐藥相關(guān)基因及耐藥發(fā)生機制。
　　方法:1.采用Affymetrix U133 plus2.0全基因組表達譜芯片，分析KM3與KM3/BTZ之間的基因表達。
　　2.采用RT-PCR法進一步檢測基因表達的差異性。
　　3.采用Western Blot法進一步檢測差異基因蛋白表達水平的差異性。

2、
　　4.采用RT-PCR法檢測初診多發(fā)性骨髓瘤患者與難治復發(fā)多發(fā)性骨髓瘤患者差異基因的表達。
　　5.運用分子注釋系統(tǒng)MAS3.0軟件和已知耐藥相關(guān)基因進行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果:1.KM3/BTZ與KM3相比，670個基因的表達具有差異性，差異表達10倍以上基因32個，主要涉及轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號傳導通路等生物效應過程分子;HSPB2、ZNF及MS4A家族部分基因在KM3中低表達，然而在KM3/BTZ中明顯上調(diào);
　

3、　2.RT-PCR法檢測顯示，在KM3和KM3/BTZ細胞中，除JUN基因，其他7個基因（CA12、CYP1B1、EPB41 L3、HSPB2、MS4A4A、SDPR、PAWR）與芯片檢測表達差異結(jié)果相符。
　　3.Western Blot法檢測顯示，Par4蛋白表達與芯片檢測表達差異結(jié)果相符。
　　4.復發(fā)進展MM患者PAWR基因表達水平(0.034±0.013)，明顯低于初診MM患者PAWR基因表達水平(0.11±0.0

4、53)，P＜0.05。
　　5.采用分子注釋系統(tǒng)(MAS)3.0中的GO生物學過程對基因表達差異富集分析顯示，耐藥細胞株相對于原代細胞株上調(diào)基因的表達差異主要參與免疫反應、依賴DNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄、信號轉(zhuǎn)導、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、細胞黏附及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等方面。下調(diào)基因主要集中在信號轉(zhuǎn)導、離子轉(zhuǎn)運、依賴DNA的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)導及細胞黏附。
　　結(jié)論:1.在KM3與KM3/BTZ篩選中，ZNF、MS4A家族部分成員以及