乳鐵蛋白的分離純化以及免疫佐劑作用的研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，簡稱LF)是存在于哺乳動物外分泌液中的一種非血紅素鐵結(jié)合糖蛋白，由轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)變而來。1938年SorensenM和SorensenSPL首次從牛乳中分離出來，1953年Polis等在制備乳過氧化物酶時得到了它的粗制品。1960年Johansson和Montreuil等從人乳中首次分離出LF。LF是一種多功能蛋白質(zhì)，具有廣譜抗菌、抗病毒感染作用；能調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵的平衡；調(diào)節(jié)機體免疫功能，增強機體抗病能力；能同

2、多種抗生素及抗真菌制劑協(xié)同作用，更有效地治療疾病。 本試驗采用鹽析和凝膠層析相結(jié)合的方法分離純化LF。首先將奶牛產(chǎn)犢后24h之內(nèi)的新鮮初乳進行乳樣前期處理，除去脂肪和酪蛋白，得到乳清；然后利用鹽析的方法對乳清進行粗分離，硫酸銨濃度分別為30％～50％～80％，除去與LF分子量差異較大的蛋白質(zhì)；然后選用SephadexG-100進行凝膠層析，在20℃條件下以0.2mL/min的流速進行洗脫，洗脫液選用PH7.4的PBS；待出現(xiàn)峰值

3、后收集樣品，每管收集1mL；經(jīng)SDS-PAGE測定，所得LF組分顯示為單一區(qū)帶，相對分子質(zhì)量為90，000Da，LF精制品中LF的純度為92％；利用分光光度法檢測LF的質(zhì)量濃度為101.73μg/mL。 本試驗以蜂膠、左旋咪唑、復方中藥等新型佐劑作為LF的對照，分別制成了添加不同佐劑的油乳劑疫苗和弱毒疫苗，將蛋用型雛雞做為免疫對象，隨機分成12組，每組10只，以0.2mL/只為免疫劑量，分別在10日齡頸部皮下注射，同時采用Clo

4、ne30弱毒苗滴鼻、點眼作基礎免疫。分別于免疫前、首免后5d、10d、15d、和二免后5d、10d、15d、20d、25d、30d、35d時，從各試驗組中隨機選取5只健康雞無菌采集心血各0.5mL分離血清，采用β-微量血凝抑制試驗檢測新城疫HI抗體效價。結(jié)果顯示，LF弗氏佐劑疫苗組的HI抗體效價增長速度最快，持續(xù)時間最長；LF的免疫增強效果與蜂膠、左旋咪唑和復方中藥差異不顯著，與油乳劑疫苗、弱毒疫苗差異顯著，與對照組差異極顯著。說明LF