高速逆流色譜分離純化蔓荊子等藥材活性成分的研究.pdf

1、傳統(tǒng)中醫(yī)藥是世界醫(yī)學的一個重要組成部分，隨著現(xiàn)代中藥學的發(fā)展和新藥開發(fā)的要求，人類迫切需要了解中藥的有效成分。中國加入WTO后，中醫(yī)藥現(xiàn)代化顯示出更加廣闊的發(fā)展前景，對傳統(tǒng)藥、民族藥、中草藥、植物藥等天然藥物的分離技術也提出了更高的要求。因而開展中藥有效成分分離新方法研究對于促進現(xiàn)代中藥學和中藥現(xiàn)代化的發(fā)展具有重要意義。 高速逆流色譜(High-Speed Counter-Current Chromatography，簡稱HSC

2、CC)是20世紀80年代初，由Yoichiro Ito博士在液一液分配色譜的基礎上研究和發(fā)展起來的一種現(xiàn)代色譜分離制備技術<'[1]>。它利用兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種特殊的單向性流體動力學平衡，當其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續(xù)洗脫的過程中能保留大量的固定相，物質(zhì)的分離依據(jù)其在兩相中分配系數(shù)的不同而實現(xiàn)。由于不需要固體支撐體，因而避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等，不僅使樣品能夠全部回收，回收

3、的樣品也能反映其本來的特性，特別適合于天然生物活性成分的分離。目前，HSCCC技術已發(fā)展成為一種備受關注的新型分離純化技術，廣泛應用于生物醫(yī)藥、天然產(chǎn)物、食品、化妝品等領域。 本文對HSCCC在中草藥有效成分的制備性分離純化方面的應用進行了研究，建立了分離純化中藥蔓荊子、升麻、丹參和魚腥草中的有效成分的新方法，并利用紫外光譜(UV)、高效液相色譜(HPLC)、核磁共振波譜(NMR)等對目標產(chǎn)物的純度和化學結(jié)構進行了分析和鑒定。本

4、工作可以為蔓荊子等四種中藥及其制劑的鑒別及質(zhì)量控制、藥理研究與開發(fā)提供參考。 一、HSCCC分離純化蔓荊子主要化學成分的研究建立了HSCCC分離純化蔓荊子中主要化學成分的新方法。溶劑體系為石油醚．乙酸乙酯．甲醇．水，固定相為(5：5：3：7，v/v)體系的上相，以(5：5：3：7，v/v)和(5：5：5：5，v/v)體系的下相為流動相進行梯度洗脫。從200 mg蔓荊子粗提物中一步分離純化得到15 mg對羥基苯甲酸、7.8 mg

5、3，6，7-三甲基槲皮萬壽菊素、16 mg紫花牡荊素和6 mg艾黃素。經(jīng)HPLC分析，純度分別為99.7％，97.9％，99.9％和94.8％。由Uv光譜、<'1>H-NMR和<'13>C-NMR數(shù)據(jù)確定了其化學結(jié)構。 二、HSCCC分離純化升麻主要化學成分的研究采用大孔吸附樹脂對升麻藥材進行預處理，初步除去樣品中的大量雜質(zhì)之后，應用HSCCC從中藥升麻中分離純化得到四個化合物。溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(4：6：3：

6、7，v/v)，下相為流動相。從100 mg升麻粗提物中一步分離純化得到15.6 mg升麻素、12.8 mg咖啡酸、32.2 mg異阿魏酸和10.6 mg阿魏酸。經(jīng)HPLC分析，純度分別為99.1％，98.6％，99.9％和96.2％。由UV光譜、<'1>H-NMR和<'13>C-NMR數(shù)據(jù)來確定了其化學結(jié)構。 三、HSCCC分離純化丹參醌類成分的研究應用HSCCC分離純化丹參中的醌類化合物，所用溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-

7、水(6：4：6．5：3.5，v/v)。從200 mg丹參粗提物中分離純化得到14.21 mg二氫丹參酮Ⅰ，9.83mg 1，2，15，16-四氫丹參新醌，36.27 mg隱丹參酮，20.23 mg丹參酮Ⅰ，24.62 mg甘西鼠尾新酮，12.31 mg丹參新酮和38.78 mg丹參酮ⅡA。經(jīng)HPLC分析，純度分別為97.6％，95.2％，99.1％，99.1％，90.3％，99.4％和99.5％。由UV光譜和<'1>H-NMR數(shù)據(jù)來確定

8、了其化學結(jié)構。 四、HSCCC分離純化魚腥草黃酮類成分的研究建立了HSCCC分離純化魚腥草黃酮類成分的新方法。溶劑體系為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3：7：1：9，v/v)。從200 mg魚腥草粗提物中一步分離純化得到5.5 mg未知物、16.6 mg槲皮苷和28.7 mg槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖苷，經(jīng)HPLC分析其純度分別為98.1％、99.5％和99.3％。由UV光譜、<'1>H-N