大腸桿菌F18菌毛FedF亞單位單克隆抗體的制備及其初步應用.pdf

1、仔豬水腫病(ED)和斷奶仔豬腹瀉(PWD)是由表達F18菌毛的大腸桿菌引起的仔豬常見的兩種傳染病，在養(yǎng)豬業(yè)的生產中危害很大。細菌利用自身的菌毛介導其在腸道內的定居、繁殖，多數(shù)產生F18ab菌毛的菌株同時產生志賀毒素Ⅱ型變異體(STx2e或SLT-Ⅱv)引起腸毒血癥，導致內皮細胞以及小血管和毛細血管的平滑肌壞死，改變血管通透性，進而仔豬出現(xiàn)水腫，當腦部水腫壓迫神經組織后，出現(xiàn)神經癥狀；產F18ac菌株常常產生不耐熱腸毒素(LT)或耐熱腸毒

2、素(ST)，也有些菌株帶有SLT-Ⅱv基因，當其菌毛黏附素與小腸上皮細胞的微絨毛和細胞表面的受體相結合，并牢固地黏附于腸黏膜后，細菌定居、繁殖，產生并釋放大量腸毒素，對其靶細胞產生毒性作用，腸內水鹽代謝平衡失調導致腹瀉。 F18菌毛蛋白結構主要有六個部分：A、B、C、D、E、F。其中A亞單位是菌毛的主要結構亞單位，構成菌毛的主干，B、C亞單位在菌毛的成熟、裝配及合成中起伴侶或推進作用，F(xiàn)edE和FedF為F18菌毛黏附所必需，并

3、影響菌毛的長度，如果兩個fedF和fedE發(fā)生突變，則會使菌毛長度發(fā)生改變，同時也可能會使細菌喪失對小腸上皮細胞的吸附能力。 本研究利用融合蛋白(GST-FedF)制備免疫抗原，免疫BALB/c小鼠，利用淋巴細胞雜交瘤技術，采用間接ELISA篩選出兩株穩(wěn)定分泌針對FedF亞單位的單克隆抗體C8，E7，ELISA效價分別為12log2，14log2。間接免疫熒光試驗和小腸上皮細胞黏附阻抑試驗結果表明抗FedF單抗不但具有識別F18

4、天然菌毛的生物活性，可以用于臨床檢測，而且能阻斷F18細菌對小腸上皮細胞的黏附，進一步論證此亞單位是F18菌毛的黏附功能單位；免疫膠體金試驗可以看到金顆粒在菌毛表面上呈規(guī)律性分布，說明所制備的單抗針對菌毛。 研究證明，表達菌毛的F18細菌都是通過FedF蛋白和腸上皮細胞上的受體結合。通過對F18ab菌毛的fedF和fedE基因序列的分析，對不同的F18菌株進行了基因克隆，發(fā)現(xiàn)FedF是F18菌毛的高度保守性亞單位，核苷酸序列同源