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1、目的：構(gòu)建可以用于缺血性腦血管病基因治療的腺相關(guān)病毒載體rAAV-VEGF<,165>,并研究其在體內(nèi)外的表達(dá).方法：利用DNA重組技術(shù),以VEGF<,165>取代XX <,2>-GFP中的gfp基因,構(gòu)建AAV載體質(zhì)粒XX <,2>-VEGF<,165>.用XX <,6>-80和XX <,2>-GFP/ XX <,2>- VEGF<,165>磷酸鈣共轉(zhuǎn)染rAAV包裝細(xì)胞系HEK293,獲得重組病毒載體rAAV-GFP/rAAV- VE
2、GF<,165>,再經(jīng)"氯仿處理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"三步法純化.將病毒載體體外轉(zhuǎn)染293細(xì)胞、體內(nèi)行大腦皮層內(nèi)注射,研究其表達(dá)情況.結(jié)果：通過(guò)雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,"氯仿處理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"三步法純化,可以得到高滴度的rAAV- VEGF<,165>,且可在體內(nèi)外表達(dá).結(jié)論：成功地構(gòu)建了rAAV- GFP/rAAV-VEGF<,165>載體,初步研究了其在體內(nèi)外的表達(dá)情況,為缺血性腦血管病的基因治療打下
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