姜黃素對人舌鱗癌Tca8113細胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、背景和目的 舌鱗癌(tongue squamous cell carcinoma TSCC)是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，在口腔鱗狀細胞癌中構成比最高，我國約占32.3％，歐美國家報道在21％～52％之間。近年來舌癌發(fā)病率呈快速上升趨勢，已引起各國的注意。臨床上由于腫瘤生長快、浸潤性強，加之舌體有豐富的淋巴管和血液循環(huán)以及舌的運動頻繁，常發(fā)生早期頸淋巴結轉移，因此舌癌有較高的復發(fā)率、淋巴轉移率，預后較差，被認為是一種臨床生物學行為

2、較惡劣的惡性腫瘤，術后常需配合化療以提高療效。但是傳統(tǒng)化療常因腫瘤細胞耐藥或藥物毒副作用大患者不能耐受而導致治療失敗，所以研究和開發(fā)新的抗癌藥物，有效治療舌鱗癌將是臨床研究的一個重點。中藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥，尤其近年來其在抗腫瘤方面的獨特作用，成為國內外醫(yī)藥工作者關注的一個熱點。姜黃素(curcumin)是中藥姜黃的一種活性成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、清除自由基、抗微生物以及對心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多方面藥理作用，尤其姜黃素的抗腫瘤作用

3、日益引起人們重視，國內外眾多學者對姜黃素的抗腫瘤作用及其機制做了大量研究，證實姜黃素具有抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡的確切作用，然而有關其抗頭頸腫瘤研究卻罕見報道。本研究用一定濃度的姜黃素作用人舌鱗癌細胞株Tca8113細胞，觀察中藥有效成分姜黃素對人舌鱗癌Tca8113細胞株增殖的抑制作用，初步探討姜黃素對Tca8113細胞株抑制作用的可能相關機制，為臨床研究提供新思路和借鑒。材料與方法人舌鱗癌細胞株Tca8113由上海交通大學

4、口腔醫(yī)學院提供，姜黃素由上海友思生物技術有限公司生產。將Tca8113細胞培養(yǎng)于普通的RPMI．1640培養(yǎng)基中，實驗組用含有不同濃度姜黃素(5μgmol/L，10μmol/L，20μmol/L，40μmol/L)的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，對照組細胞正常培養(yǎng)，至規(guī)定時間終止培養(yǎng)，進行各項指標檢測。采用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)的變化，MTT法檢測其生長抑制效應，流式細胞術分析細胞周期變化和細胞凋亡，定量分析Caspase-3表達的變化，免疫細胞化學

5、染色觀察Survivin、Ki-67、Bax等基因表達的變化，統(tǒng)計分析應用SPSS13.0軟件，采用重復測量方差分析、x<'2>檢驗進行統(tǒng)計學處理，取α=0.05為顯著性檢驗水準。 結果 (1)隨著姜黃素濃度升高與作用時問的增加，其對細胞的生長、增殖抑制作用明顯增強，在倒置顯微鏡下觀察可見細胞生長增殖變慢、細胞形態(tài)變圓、變小，脫壁比細胞越來越多，漂浮在培養(yǎng)基中。MTT法檢測結果顯示姜黃素對細胞抑制效應有濃度、時間依賴性。

6、 (2)隨著姜黃素濃度升高、作用時間的增加，細胞周期中G<,1>期細胞比例逐漸增加，由46.20％上升到64.80％，S期細胞比例由53.10％下降到31.40％。不同濃度之間、不同時間之間對細胞G<,1>期的阻滯作用有明顯差異性(P<0.05)。 (3)隨著姜黃素濃度升高、作用時間的增加，凋亡細胞比例逐漸增高，由1.80％上升到22.27％。不同濃度之間、不同時間之間對細胞凋亡率對改變有明顯差異性(P<0.05)。

7、 (4)姜黃素作用Tca8113細胞后，細胞中凋亡抑制基因Survivin與核增殖抗原Ki-67蛋白表達下降，與對照組相比Survivin在胞漿的著色減輕、Ki-67在胞核著色減輕，促凋亡基因Bax與促凋亡蛋白酶Caspase-3的表達明顯增強，Bax在細胞漿著色增強，蛋白定量分析Caspase-3表達量增加。 結論 (1)姜黃素能明顯抑制Tca8113細胞的生長、增殖，并有濃度、時間依賴性。 (2)姜黃素能

8、改變Tca8113細胞的周期分布，有明顯G<,1>期阻滯作用，并有量-效濃度、時-效關系。 (3)姜黃素可使Tca8113細胞的凋亡率增加，并有量-效濃度、時-效關系。 (4)姜黃素可下調Tca8113細胞中凋亡抑制基因Smrvin、核增殖抗原Ki-67的表達，上調促凋亡基因Bax、促凋亡蛋白酶Caspase-3的表達。 (5)細胞周期阻滯、凋亡抑制基因Survivin，核增殖抗原Ki-67表達的下降，促凋亡基因Bax和