茶多酚對人肝癌細胞株SMMC-7721的生物效應(yīng).pdf

1、目的：　　通過茶多酚(TP)對人肝癌細胞株SMMC-7721作用，觀察TP對細胞增殖影響、細胞形態(tài)學(xué)改變、細胞周期改變，確定TP對SMMC-7721細胞的劑量反應(yīng)關(guān)系。　　TP作用細胞后，測定細胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表達量的改變，初步探討激活蛋白1(AP-1)、P16與CyclinD1在信號傳導(dǎo)通路中的作用，闡明TP對人肝癌細胞的分子作用機制。 方法：　　本實驗以體外培養(yǎng)的人肝癌細胞株SMMC-7721為研究

2、對象，觀察TP對人肝癌細胞的生物效應(yīng)，(1)MTT比色法測定細胞增殖率，確定TP對人肝癌細胞的劑量反應(yīng)關(guān)系。(2)蘇木精-伊紅(HE)染色法觀察細胞形態(tài)學(xué)改變。(3)流式細胞儀檢測細胞周期?！　檫M一步探討TP作用人肝癌細胞株SMMC-7721的機理，(1)免疫細胞化學(xué)、灰度值分析比較，確定細胞CyclinD1和P16蛋白表達量改變。(2)構(gòu)建AP-1報到質(zhì)粒，以psv-β-gal質(zhì)粒為內(nèi)參照測量AP-1蛋白活性。 結(jié)果：　

3、　TP可抑制體外培養(yǎng)人肝癌細胞增殖，隨著TP濃度增加，作用時間延長，細胞增殖率逐漸降低，其中48h內(nèi)，25.0mg/L與50.0mg/L兩劑量組增殖率差異有顯著性(增殖率分別為94.12％和80.08％，t=4.011，P＜0.01)。TP作用細胞后出現(xiàn)細胞凋亡改變，表現(xiàn)為細胞變小變圓，核染色質(zhì)致密濃縮。在48h內(nèi)隨著TP濃度的增加，S期細胞從60.4％(0mg/L)降低到23.9％(100mg/L)；G1期細胞從31.6％(0mg/L

4、)上升到63.6％(100mg/L)，細胞阻滯在G1期?！　P使CyclinD1蛋白表達降低，但P16蛋白表達沒有影響，TP抑制細胞AP-1活性。 結(jié)論：　　(1)TP抑制體外培養(yǎng)人肝癌細胞增殖，細胞出現(xiàn)凋亡改變，細胞阻滯在G1期，并呈劑量反應(yīng)關(guān)系。　　(2)TP抑制人肝癌細胞增殖，阻滯在G1期的可能機理：茶多酚通過抑制細胞AP-1活性，降低CyclinD1表達，細胞阻滯在G1期，從而抑制人肝癌細胞增殖。但CyclinD