絲裂素活化蛋白激酶級聯(lián)途徑在肝臟缺血再灌注損傷和缺血預處理中作用的研究.pdf

1、第一部分動物模型的建立及缺血預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷保護作用的研究 目的：建立大鼠肝臟缺血再灌注和缺血預處理模型，觀察缺血預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響，為以后的研究提供基礎。 方法：采用大鼠肝原位部分缺血再灌注模型，120只Wistar大鼠隨機分為缺血再灌注組(IR)，缺血預處理組(IP)與假手術組(SO組)，IP、IR組分別于復流0、0.5、1、2、4、8、12、24h時取材，應用生化分析儀檢測各組血清谷丙轉

2、氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)的變化，并觀察肝組織病理改變。 結果：(1)在缺血再灌注組與缺血預處理組，隨著缺血后再灌注時間的延長，大鼠血清ALT、AST明顯升高。約在4小時時達最高峰，而后漸下降。 (2)給予缺血預處理后，與單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，復灌后血清ALT、AST明顯下降，在0.5h～8h組差異顯著。(復灌后4小時ALT為1263±156.38u/Lvs945.00±104.38u/L，P＜0.05；AST

3、為2386.67±360.29u/Lvs1563.40±253.01u/L，P＜0.05)。 (3)病理檢查見光鏡下缺血再灌注組隨著再灌注時間的延長，肝細胞壞死加劇，炎癥細胞浸潤更明顯。與缺血再灌注組相比，缺血預處理組的肝細胞壞死范圍變小，損傷減輕。 結論：缺血預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷具有保護作用。 第二部分大鼠肝臟缺血再灌注和缺血預處理后MAPK級聯(lián)通路表達變化的研究 目的：觀察肝缺血再灌

4、注和缺血預處理后MAPK級聯(lián)通路中各種亞類(p38MAPK、JNK和ERK)活化的情況，以探討其在肝臟缺血再灌注損傷和缺血預處理保護中的作用。 方法：120只Wistar大鼠隨機分成缺血再灌注組(IR)，缺血預處理組(IP)與假手術組(SO組)，利用肝原位部分缺血再灌注模型，于復灌后0、0.5、1、2、4、8、12、24小取材，應用免疫組織化學的方法對磷酸化的p-P38、p-JNK和p-ERK進行免疫組化檢測并作半定量分析，觀察

5、其在缺血再灌注損傷和缺血預處理中的變化。 結果：(1)p-ERK在缺血后即有輕度地增高，但在再灌注后30min開始增高明顯，持續(xù)到再灌注后4小時，高峰出現(xiàn)在再灌注后2小時。與IR組相比，IP組p-ERK的表達在再灌注后1小時、2小時和4小時較IR組增高(p＜0.05)。 (2)p-JNK在缺血后即有輕度地增高，但在再灌注后30min開始增高明顯，持續(xù)到再灌注后4小時，高峰出現(xiàn)在再灌注后2小時。與IR組相比，IP組p-JN

6、K的表達在再灌注后1小時、2小時和4小時較IR組降低(p＜0.05)。 (3)p-P38在缺血后即有輕度地增高，但在再灌注后30min開始增高明顯，高峰出現(xiàn)在再灌注后1小時，2小時后開始下降，表達程度維持在缺血后水平。與IR組相比，IP組p-P38的表達較IR組高，但僅在再灌注后1小時明顯增高(p＜0.05)。 結論：缺血預處理可通過增高ERK和P38的磷酸化水平，降低JNK的磷酸化水平減輕缺血再灌注導致的肝臟損傷，MA

7、PKs通路可能在缺血再灌注損傷和缺血預處理的保護作用中取至關重要的作用。 第三部分缺血預處理和缺血再灌注對大鼠肝臟即早基因c-fos和c-jun表達變化的影響 目的：觀察大鼠肝臟缺血再灌注和缺血預處理對即早基因c-fos、c-jun表達的影響。 方法：采用大鼠原位部分缺血再灌注模型，120只Wistar大鼠隨機分為缺血再灌注組(IR)，缺血預處理組(IP)和假手術組(SO)，每組又分為8個亞組(n=6)

8、，于復灌后0h、0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h取材，應用RT-PCR法檢測各組c-fos、c-junmRNA的表達。 結果：(1)在IR組再灌注后0.5小時～2小時c-fos和c-jun的表達均增高，1小時達高峰；4小時后只有c-jun有持續(xù)較高的表達，c-fos的表達開始下降； (2)IP組c-fos和c-junmRNA的表達較IR組低； (3)與IR組相比，IP組c-junmRNA在0.5h

9、、1h和2h組明顯降低(p＜0.05)。 結論：缺血預處理能有效地保護肝臟免受缺血再灌注造成的損傷，這種保護效應的機制可能與影響即早基因的轉錄有關。 第四部分大鼠肝缺血再灌注損傷和缺血預處理對細胞凋亡、增殖的影響 目的：觀察肝缺血再灌注和缺血預后處理對肝細胞增殖、凋亡的影響，以探討二種背景下的細胞周期變化。 方法：120只Wistar大鼠隨機分成缺血再灌注組(IR)，缺血預處理組(IP)與假手術

10、組(SO組)，利用肝原位部分缺血再灌注模型，于復灌后0、0.5、1、2、4、8、12、24小取材，應用流式細胞儀，以Ki-67抗原的檢測和Sub-G1法分別為細胞增殖與細胞凋亡(Ap指數(shù))的定量分析方法，觀察缺血再灌注損傷變化以及缺血預處理對這一過程的影響。 結果：(1)在IP組，Ki-67相對表達率在復灌后有兩個峰值，分別于復灌后的1、12小時出現(xiàn)，而IR組在復灌后只有一個峰值，于復灌后24小時出現(xiàn)。復灌后，IP各組均有明顯增

11、高，而IR于復灌后2小時才有增高； (2)在IP組，復灌后肝細胞凋亡率也有兩個峰，分別于復灌后的0、4小時，而IR組在復灌后肝細胞凋亡率逐漸增高，峰值于復灌后12小時出現(xiàn)； (3)IP與IR組相比，Ki-67在復灌后的0、1、24小時差別有意義；Ap在復灌后的1小時以上差別有意義。 結論：缺血預處理可減輕缺血再灌注損傷后的肝細胞凋亡，并在復灌早期有細胞增殖現(xiàn)象，可能是其對缺血再灌注損傷起到保護作用的機制之一。