卵黃抗體對(duì)鼠傷寒沙門氏菌感染小鼠腸道免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到外來病原菌入侵時(shí)，免疫系統(tǒng)被激活以抵御病原菌對(duì)機(jī)體的傷害。然而免疫系統(tǒng)的高度活化會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物采食量及體重下降等免疫應(yīng)激現(xiàn)象，這給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此如何緩解免疫應(yīng)激具有非常重要的實(shí)際意義。抗生素可有效改善動(dòng)物的生長(zhǎng)狀況，但隨著動(dòng)物產(chǎn)品中藥物殘留和細(xì)菌耐藥性等問題的出現(xiàn)，迫切需要尋找一種既能有效控制養(yǎng)殖動(dòng)物疾病，又不帶來食品安全問題和環(huán)境隱患的新產(chǎn)品以替代抗生素。研究表明，卵黃抗體可用于動(dòng)物感染性疾病的防治，因其具有安

2、全、高效、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，所以被認(rèn)為是最有前景的新一代綠色、安全型抗生素替代品。然而，關(guān)于IgY的作用機(jī)理現(xiàn)在還未闡明，IgY在抑制病原菌的同時(shí)，能否對(duì)動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)起到調(diào)節(jié)作用，有待于進(jìn)一步的研究。本課題在前期研究的基礎(chǔ)上，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分析IgY對(duì)鼠傷寒沙門氏菌攻毒小鼠腸道黏膜各種T淋巴細(xì)胞的影響。此外，通過體外實(shí)驗(yàn)還考察了IgY對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬活性和樹突細(xì)胞成熟度的影響。
　　IgY對(duì)攻毒小鼠腸道黏膜各種T淋巴細(xì)胞的影響:昆

3、明小鼠隨機(jī)分為4組，用鏈霉素預(yù)處理2d，12h后灌胃PBS、非特異性IgY和特異性IgY，持續(xù)3d，在此期間觀察小鼠的狀態(tài)、死亡率和體重。3d后解剖小鼠并取小腸，分離腸道派爾淋巴結(jié)、上皮層以及固有層的淋巴細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各種淋巴細(xì)胞的數(shù)量變化。結(jié)果表明，鼠傷寒沙門氏菌攻毒后，小鼠精神狀態(tài)萎靡，死亡率達(dá)到60％，體重明顯減輕，派爾淋巴結(jié)出現(xiàn)腫大，CD3+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞分別提高10％和14％。上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞出現(xiàn)大量增加，CD8

4、+T細(xì)胞和TCRγδ+T細(xì)胞分別增加18％和16％。固有層中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞升高8％和12％?？诜禺愋訧gY后，小鼠精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，死亡率降至20％，但體重?zé)o明顯變化。派爾淋巴結(jié)腫大狀況好轉(zhuǎn)，并且派爾淋巴結(jié)中總的T細(xì)胞（CD3+T細(xì)胞）降低6.5％，基本恢復(fù)到正常水平。特異性IgY還可顯著降低上皮層中CD8+T細(xì)胞和TCRδ+T細(xì)胞的比例，分別降低12％和10％。固有層中的淋巴細(xì)胞在特異性IgY的作用下，也顯著降低，其中C

5、D4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞分別減少7％和12％。這表明，特異性IgY可緩解鼠傷寒沙門氏菌攻毒引起的炎癥反應(yīng)，對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用。
　　IgY對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬活性的影響:用FITC標(biāo)記鼠傷寒沙門氏菌，然后巨噬細(xì)胞與細(xì)菌共培養(yǎng)3h后，檢測(cè)巨噬細(xì)胞的吞噬率及NO的釋放量。結(jié)果表明，非特異性IgY和特異性IgY可顯著提高巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬率，分別提高20％和33％。并且特異性IgY顯著減少了巨噬細(xì)胞NO的分泌，使NO的分泌量由原先的26

6、μmol/L降低至14μmol/L。這表明IgY可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬率并減少炎癥因子的分泌。
　　IgY對(duì)樹突細(xì)胞成熟度的影響:從小鼠骨髓中分離原代細(xì)胞，用10 ng/mL rGM-CSF和rIL-4誘導(dǎo)分化成樹突細(xì)胞，收集第7d的未成熟樹突細(xì)胞。將鼠傷寒沙門氏菌與未成熟樹突細(xì)胞以及特異性IgY共同培養(yǎng)3h，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)樹突細(xì)胞表面標(biāo)志的變化。結(jié)果表明，鼠傷寒沙門氏菌攻毒后樹突細(xì)胞表面標(biāo)志MHCⅡ，CD40，CD80，C