芳香烴受體在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎中的作用研究.pdf

1、第一部分實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎大鼠模型的制備
　　目的：實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎（experimental autoimmune neuritis, EAN）動(dòng)物是研究人類(lèi)急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根神經(jīng)?。╝cute inflammatory demyelinating polyneuropathy, AIDP）的經(jīng)典模型。本部分?jǐn)M通過(guò)免疫誘導(dǎo)的方法，建立EAN大鼠模型。
　　方法：Lewis大鼠皮下局部注射周?chē)窠?jīng)髓鞘蛋

2、白P253-78與完全弗氏佐劑的混合乳液免疫法（P2/CFA）誘導(dǎo)產(chǎn)生EAN。通過(guò)臨床癥狀評(píng)分、體重變化以及組織病理學(xué)染色等方法，觀察EAN的病程特點(diǎn)，評(píng)估建模是否成功。
　　結(jié)果：免疫后第10.2±1.3天大鼠出現(xiàn)EAN臨床癥狀。免疫后第15天達(dá)到EAN疾病高峰期，此時(shí)臨床癥狀評(píng)分為6.6±0.6。大鼠從免疫后第17天開(kāi)始恢復(fù)，直到第20天臨床癥狀完全消失。在EAN疾病高峰期，坐骨神經(jīng)出現(xiàn)明顯脫髓鞘改變同時(shí)伴有大量細(xì)胞浸潤(rùn)。

3、r>　　結(jié)論：周?chē)窠?jīng)髓鞘蛋白P253-78能成功誘導(dǎo)大鼠EAN，成功率100％，該模型的建立為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)打下了基礎(chǔ)。
　　第二部分芳香烴受體在EAN大鼠坐骨神經(jīng)中的表達(dá)
　　目的：研究芳香烴受體（aryl hydrocarbon receptor, AhR）在EAN大鼠坐骨神經(jīng)中的表達(dá)，從而探討AhR在自身免疫性神經(jīng)炎中的作用。
　　方法：運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色（含雙重染色）的方法，檢測(cè) AhR在EAN大鼠坐骨神經(jīng)中的

4、表達(dá)，明確AhR+細(xì)胞的來(lái)源和分布。
　　結(jié)果：在大鼠EAN疾病高峰期的坐骨神經(jīng)組織中，AhR+細(xì)胞的數(shù)目為：205.9±10.3/mm2，浸潤(rùn)集中發(fā)生在血管周?chē)浼?xì)胞的主要來(lái)源是T細(xì)胞（59.1±4.3%）和巨噬細(xì)胞（29.8±3.4%）。
　　結(jié)論：AhR+細(xì)胞在EAN大鼠坐骨神經(jīng)的聚集與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)；AhR可能被內(nèi)源性配體激活，參與到EAN的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。
　　第三部分 VAF347激活A(yù)hR對(duì)EA

5、N的作用及機(jī)制研究
　　目的：研究AhR水溶性配體VAF347治療EAN大鼠的療效，分析VAF347激活A(yù)hR在自身免疫性神經(jīng)炎中的作用和機(jī)制。
　　方法：采用免疫組化、流式細(xì)胞技術(shù)以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法，觀察VAF347治療EAN大鼠前后坐骨神經(jīng)AhR+、IL-17+、Foxp3+、CD3+和ED1+細(xì)胞數(shù)目的變化，坐骨神經(jīng)脫髓鞘情況以及外周血和腹股溝淋巴結(jié)IL-17、Foxp3、IFN-γ、TGF-β1、IL-4和

6、IL-10的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：EAN大鼠經(jīng)VAF347治療后臨床癥狀顯著改善，評(píng)分下降，坐骨神經(jīng)脫髓鞘程度明顯減輕。VAF347激活 AhR后，坐骨神經(jīng)局部AhR+、IL-17+及CD3+細(xì)胞數(shù)和比例明顯下降，ED1+和Foxp3+細(xì)胞數(shù)雖然降低但其比例上升。VAF347治療后，外周血和淋巴結(jié)IL-17+細(xì)胞比例下降，而Foxp3+細(xì)胞比例明顯上升。同時(shí)VAF347治療使淋巴結(jié)IL-17和IFN-γmRNA表達(dá)明顯降低，TGF

7、-β1和Foxp3表達(dá)顯著增加，而IL-4和IL-10的表達(dá)在治療前后未發(fā)生明顯變化。
　　結(jié)論：VAF347激活A(yù)hR明顯減輕全身炎癥反應(yīng)，改善EAN臨床癥狀，減輕坐骨神經(jīng)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)及脫髓鞘，為自身免疫性神經(jīng)炎的治療提供了新的思路。VAF347激活A(yù)hR可能通過(guò)TGF-β1通路調(diào)節(jié)Foxp3+細(xì)胞，從而在EAN大鼠中發(fā)揮抗炎作用。
　　第四部分 TGF-β1信號(hào)通路在VAF347激活A(yù)hR治療EAN中的作用
　　

8、目的：探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）信號(hào)通路在VAF347激活A(yù)hR治療EAN中的作用。
　　方法：采用可溶性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1II型受體（soluble transforming growth factor-βl receptor II, sTβRII）抑制TGF-β1信號(hào)通路，通過(guò)移植經(jīng)VAF347治療的EAN大鼠CD4+T細(xì)胞，借助EAN臨床評(píng)分和淋巴結(jié)炎癥因子的表達(dá)來(lái)觀察P2/CFA能否誘發(fā)EAN病程。
　　

9、結(jié)果：與CD4+Control組相比，CD4+VAF347組臨床癥狀評(píng)分明顯降低，病程縮短（P<0.05），iNOS、TNF-α、IL-1β炎癥因子mRNA表達(dá)顯著下降而TGF-β1表達(dá)顯著上升（P<0.01）；sTβRII+CD4+VAF347組臨床癥狀評(píng)分以及 iNOS、TNF-α、IL-1β和 TGF-β1水平與CD4+Control組無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：在EAN大鼠模型中，VAF347激活A(yù)hR，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化，